南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (2): 287-293.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.02.18
曾 娇,李心竹,殷琳莹,陈 婷,侯 晋
ZENG Jiao, LI Xinzhu, YIN Linying, CHEN Ting, HOU Jin
摘要: 目的 通过体外实验探讨牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)破坏内皮屏障功能的分子机制。方法 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养形成屏障后,使用感染复数(MOI)100的P. gingivals感染细胞,对照组为未感染P. gingivals的HUVECs;通过跨膜电阻值(TEER),异硫氰酸荧光素(FITC)-右旋糖酐通透性实验和细菌易位实验来评估内皮屏障功能;并使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot实验检测P. gingivals对构成内皮屏障结构的主要蛋白紧密连接蛋白1(ZO-1),occludin和VE-cadherin表达的影响。结果 HUVECs在接种培养后第5天,其跨膜电阻值趋于稳定,体外内皮屏障形成。与对照组相比,感染P. gingivals后0.5 h,内皮屏障功能即会发生改变,并且随着感染时间的延长,屏障功能障碍更加显著,主要表现为:跨膜电阻值下降、40 000 /70 000 FITC-Dextran通透性上升以及易位细菌的数量增加;MTT结果显示P. gingivals对HUVECs的增殖能力没有影响(P>0.05);除此之外,与对照组相比,HUVECs感染P. gingivals后24和48 h后,qRT-PCR和Western blot结果显示被感染的 HUVECs 中 ZO-1,occludin 和 VE-cadherin 的 mRNA 和蛋白水平出现明显的下调表达(P<0.05)。结论 P.gingivalis可以通过下调细胞间连接蛋白ZO-1、occludin和VE-cadherin的表达破坏内皮屏障,导致内皮屏障功能障碍。