摘要: 目的探讨miR-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组
织CAF 及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM 2000 转染miR-181c mimics,miR-181c inhibitor,siRNA-HK2 和
HK2-vecto等;Q-PCR检测miR-181家族表达水平;Western blotting检测己糖激酶2(HK2)蛋白表达;2-NBDG法检测细胞葡萄
糖摄取率;DRY-CHEM FCD3500仪器检测细胞上清中乳酸生成;双荧光素酶报告基因系统检测HK2 mRNA表达。结果在细
胞形态上CAFs与NFs无明显区别。与NFs组相比,CAFs组葡萄糖摄取、乳酸生成和HK2蛋白表达明显增加,而miR-181家族
表达明显减少(P<0.05)。在NFs 转染inhibitor-181c 后,其HK2 蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显增加(P<0.05);相反,
CAFs转染了mimics-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显减少(P<0.05)。并且在敲低HK2细胞的CAFs中,
mimics-181c 不能减少葡萄糖摄取和乳酸生成;而mimics-181c 可以减少过表达HK2 对NFs葡萄糖摄取和乳酸生成的增强作
用。结论mir-181c可以通过抑制HK2的蛋白表达来抑制CAFs的糖酵解。