摘要： 目的构建人microRNA-338-3p（has-miR-338-3p）慢病毒表达载体并初步筛选鉴定miR-338-3p 的靶基因。方法由
miRBase数据库查找获得miR-338-3p前体序列，设计目的基因片段并人工合成；将miR-338-3p前体序列和pLV-THM 载体经双
酶切后连接，产生pLV-THM-miR-338-3p 慢病毒表达载体，双酶切后测序鉴定，筛选阳性克隆；以pLV-THM-miR-338-3p、
psPAX2和pMD2.G 质粒共转染包装细胞293T，包装产生慢病毒并测定滴度。流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p的
SW-620亚细胞系，利用Real-time RT-PCR检测miR-338-3p表达，Western-blot检测SMO蛋白表达水平，Transwell小室穿透实
验检测肿瘤细胞转移能力。结果经双酶切鉴定和测序证实，成功构建了miR-338-3p 的慢病毒表达载体pLV-THMmiR-
338-3p，倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T 表达绿色荧光。稳定过表达miR-338-3p 的SW-620 亚细胞系中，
miR-338-3p 表达水平显著高于阴性对照组和未处理组，SMO蛋白表达水平明显下降，且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的减
弱。结论成功构建了has-miR-338-3p慢病毒表达载体和稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系，初步证实miR-338-3p可
通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移，此为进一步深入研究miR-338-3p在结直肠癌中生物学功能奠
定了基础。