南方医科大学学报 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (07): 1232-.

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人CD96基因胞外区的原核表达及抗血清制备

曾建明,刘飞,谭坪海,王丽娜,李沫,陈中华,李松,龙一飞,李有强,陈茶   

  • 出版日期:2011-07-20 发布日期:2011-07-20

  • Online:2011-07-20 Published:2011-07-20

摘要: 摘要:目的原核表达并纯化人CD96胞外区蛋白,免疫家兔制备抗体。方法构建pET32-CD96重组质粒,转化大肠埃希
菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni2+-NTA树脂纯化蛋白并免疫家兔,以间接ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗
体特异性。结果质粒pET32-CD96经测序鉴定,通过SDS电泳显示能在BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约37 000;
Western blot实验结果显示制备的多克隆抗体可与HL-60细胞提取蛋白及原核表达的人CD96蛋白胞外区特异性结合。
结论成功构建并表达人CD96胞外区蛋白,免疫家兔获得高滴度抗血清,为后续研究奠定了基础。