南方医科大学学报 ›› 2020, Vol. 40 ›› Issue (07): 942-948.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.07.05
刘惠莉,王一丹,岳阳丽,张 朋,孙亚丽,陈巧华
摘要: 目的 探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度(25、50、100 ng/mL)的骨膜素处理细胞,随机分为空白组、缺氧组、骨膜素低浓度组、骨膜素中浓度组、骨膜素高浓度组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;应用荧光酶标仪检测细胞活性氧(ROS)水平;ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HIF-1α、P21、CyclinD1、Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2、P38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果 缺氧处理后可明显降低细胞存活率(P<0.05),提高P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平(P<0.05);与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。与空白组相比,缺氧组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05)。结论 骨膜素可促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡,增强细胞抗氧化能力,减轻炎症损伤,其可能通过抑制p38 MAPK信号通路的活化而发挥作用。