南方医科大学学报 ›› 2020, Vol. 40 ›› Issue (01): 79-86.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.01.11
李 勤1,许娟秀
摘要: 目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组:无处理的HTR-8/Svneo细胞(对照组);miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞(mimic组),pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞(pcDNA-CDK6+mimic组),miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞(inhibitor组)。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性(P=0.000)和浸润能力(P=0.049),下调细胞中MMP-9(P=0.004)和CDK6(P=0.014)的表达水平,上调caspase 3活性 (P=0.018)和cleaved caspase 3的表达水平(P=0.003);CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖(P=0.000)、凋亡(P=0.015)和浸润(P=0.046)的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 (P=0.011)、凋亡(P=0.004)和浸润(P=0.002)的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。