痛风是由于嘌呤生物合成代谢增加、尿酸产生过多或因尿酸排泄不良而导致的一组异质性疾病。急性痛风性关节炎（acute gouty arthritis, AGA）为痛风的典型表现形式，也是其首发症状，由于尿酸盐结晶（monosodium urate, MSU）析出、沉淀于关节腔内，导致大量炎性细胞浸润，促使关节出现剧烈疼痛、红肿和功能障碍等炎症反应。以往认为该病在我国较为罕见，但随着人民生活水平的提高，饮食结构也发生显著变化，食物中嘌呤物质含量不断地增高使该病在我国发病也日益增加，给人们带来了极大痛苦及不便。髓样细胞表达激发受体（TREM）-1是近年来新发现的免疫球蛋白超家族成员之一，在炎症放大过程中发挥重要的作用^[1]，它的发现是炎症发生机制研究的重要进展。阻断TREM-1不仅有助于自身免疫性关节炎的病理变化，而且对其他炎症性疾病的器官有一定的保护作用^[2-3]，故TREM-1的阻断可能会成为治疗AGA的新靶标。电针用于AGA的治疗已有多年，并取得较好的疗效。有研究表明^[4]，电针对关节炎大鼠有显著的镇痛效果，故能进一步改善AGA的局部症状。本课题采用MSU溶液注射法建立AGA大鼠模型，其病理表现与临床上的AGA患者相似，是由中性粒细胞诱导的炎症。故本课题可通过研究电针对AGA大鼠模型受试踝关节滑膜组织TREM-1表达的影响，以期进一步了解其对AGA的治疗机制。

秋水仙碱片（昆明制药集团股份有限公司，批号：国药准字J20030017），尿酸钠晶体（Sigma），TNF-α及IL-1β ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所），S-P Rabbit HRP Kit（DAB）兔Streptavidin-HRP试剂盒（武汉博士德生物科技有限公司），TREM-1一抗（武汉博士德生物科技有限公司）、HM-6805-I型经穴治疗仪（恒明牌）0.35×13 mm毫针（华佗牌）等。

40只SD雄性大鼠，由重庆医科大学实验动物中心提供[生产许可证号：SCXK (渝)2007-0001]，随机分为正常组、模型组、西药组、电针组，每组各10只。

正常组：不造模，按20 ml/kg予以生理盐水灌胃，1次/d，连续9 d。模型组：造模，造模前2 d开始，按20 ml/kg予以生理盐水灌胃，1次/d，连续9 d。西药组：造模，造模前2 d开始，按1 mg/kg予以秋水仙碱溶液(生理盐水溶解、稀释)灌胃，1次/d，连续9 d。电针组：造模，造模前2 d开始，参照《实验针灸学》取右侧三阴交、解溪、昆仑，毫针直刺，平补平泻，进针后在此3个穴位上接经穴治疗仪，电压9V，电流强度1~3 mA，频率为1.5~2 Hz的疏密波，强度以大鼠局部皮肤肌肉微颤为度，留针20 min，1次/d，连续9 d。

根据文献[5]加以改进，大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉，由大鼠右踝关节后侧，6号注射针针口斜面与胫骨成45°夹角插入跟腱内侧直至踝关节腔，将配制好的0.2 ml MSU溶液（浓度为2.5 g/100 ml）注入关节腔内，以关节囊对侧鼓胀为注入标准。正常组以同样的方法注射同体积生理盐水。实验过程中对动物处置符合中华人民共和国科学技术部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

处死前1H对大鼠进行功能障碍分析。0级正常步态行走，0分；Ⅰ级轻微跛行，受试下肢略弯曲，1分；Ⅱ级中度跛行，受试下肢刚触及地面，2分；Ⅲ级重度跛行，受试下肢离开地面，三足着地行走，3分。

造模第7天颈椎脱臼处死大鼠，以踝关节为中心上下0.5 cm处剪断，取下受试关节及周围软组织，快速切取关节滑膜组织，称体重，按1:5比例加生理盐水稀释，4℃匀浆，4000 r/min离心5 min，取上清液，分装于Ep管中，按ELISA试剂盒说明，检测关节滑膜组织中TNF-α及IL-1β的含量。

大鼠颈椎脱臼处死后，取部分受试关节组织放入4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋、切片。根据免疫组化试剂盒说明书，ABC染色，DBA显色，复染、脱水、透明、封片，以显微镜下细胞胞浆及胞膜内出棕色粒为阳性表达，免疫组化结果采用IHS（immunohistochemical scores）评分。

大鼠处死后剪取部分受试踝关节滑膜组织，称重剪碎，按1:5加入0.9% Nacl溶液，4 ℃ 500 r/min离心5 min，弃上清液，反复3次后再按1：5加入蛋白裂解液，4 ℃裂解，4 ℃ 12 000 r/min离心30 min，取上清液，考斯亮蓝进行蛋白定量，后经灌胶，加样，电泳，转膜，一抗、二抗室温孵育2 h，显影，用分子生物学图像分析系统测定灰度值。

采用SPSS 18.0软件对各组数据进行统计分析，数据以均数±标准差表示，差异分析采用t检验，P < 0.05表示差异具有统计学意义。

与正常组比较，模型组大鼠功能障碍指数显著增高（P < 0.01）；与模型组比较，西药组与电针组大鼠功能障碍指数显著降低（P < 0.01）；西药组与电针组比较，无显著差异（P > 0.05，图 1）。

图 1(Figure 1)

图 1 各组大鼠功能障碍指数 Figure 1 The dysfunction index of every group (n=10). vs normal group *P < 0.01, vs AGA group △P < 0.01.

与正常组比较，模型组大鼠受试踝关节滑膜组织中TNF-α及IL-1β含量增高（P < 0.05）；与模型组比较，西药组与电针组大鼠受试踝关节滑膜组织中TNF-α及IL-1β含量明显降低（P < 0.05）；西药组与电针组无显著差异（P > 0.05，表 1）。

表 1(Table 1)

表 1 各组大鼠受试踝关节滑膜组织TNF-α及IL-1β含量 Table 1 The content of TNF-αand IL-1β in ankle joint synovial tissue (n=10) Group TNF-a (ng/l) IL-1P (pg/l) Normal 128.33±6.11 1065.93±26.70 AGA 149.09±6.35※ 1249.00±44.66※ Medication 141.41±3.84△ 1210.45±12.14△ EA 139.94±4.60△ 1203.16±22.98△ Vs normal group ※P < 0.05 vs AGA group △P < 0.05.

表 1 各组大鼠受试踝关节滑膜组织TNF-α及IL-1β含量 Table 1 The content of TNF-αand IL-1β in ankle joint synovial tissue (n=10)

与正常组相比，模型组TREM-1表达量显著增加（P < 0.05）；与模型组相比，西药组与电针组TREM-1表达显著减少（P < 0.05）；而西药组与电针组之间无显著差异（P > 0.05，表 2，图 2，3）。

表 2(Table 2)

表 2 免疫组化各组大鼠受试关节滑膜组织TREM-1 IHS评分结果 Table 2 The result of TREM-1 in ankle joint synovial tissue by IHS (n=10) Group A% B TREM-1(IHS) Normal 23.50±20.84 0-1 1.50±0.97 AGA 54.70±12.23※ 2-3 4.70±2.06※ Medication 26.60±19.46△ 1-2 2.70±0.95a EA 22.00±20.01△ 1-2 2.50±0.97△ Vs normal group ※P < 0.05 vs AGA group △P < 0.05.

表 2 免疫组化各组大鼠受试关节滑膜组织TREM-1 IHS评分结果 Table 2 The result of TREM-1 in ankle joint synovial tissue by IHS (n=10)

图 2(Figure 2)

图 2 免疫组化检测各组大鼠受试踝关节组织TREM-1的表达 Figure 2 the expression of TREM-1 in ankle joint synovial tissue by immunohistochemistry (Original magnification: × 400). A: Normal group; B: AGA group; C: Medication group; D: EA group.

图 3(Figure 3)

图 3 WB检测各组大鼠受试踝关节组织TREM-1的表达 Figure 3 The expression of trem-1 in ankle joint synovial by WB. 1: Normal group; 2: AGA group; 3: Medication group; 4: EA group.

急性痛风性关节炎（AGA）属中医“湿热痹”范畴，常因饮食不节伤及脾胃，脾失健运而湿浊内生，或平素体虚感受湿热之邪，邪气壅于经络，痹阻气血经脉，并滞留于关节筋骨，从而出现关节疼痛、肿大、活动不利等症状。本病属正虚邪实之候，治疗应从脾肾入手，采用补虚泻实法。《针灸甲乙经》云：“足下热痛不能久坐，湿痹不能行，三阴交主之”，三阴交位于脾经，又为足三阴经交会穴，有清热健脾利湿，补益肝肾之功；而解溪、昆仑分别为脾经和膀胱经的经穴，属五输穴，是沟通五脏与六腑表里所在，也是脏腑经络之气流注聚集于体表之所在，针刺解溪、昆仑能激发脾肾脏腑经气传导至疼痛关节，即“气至病所” ^[6]。且电针的镇痛效果较为明显，能进一步改善AGA的局部症状。

AGA是痛风的一种典型表现形式，也是其首发症状，是由于MSU晶体析出并沉积在骨关节组织，MSU能够诱导滑膜细胞、单核细胞-巨嗜细胞等产生TNF-α及IL-1β，从而引起关节及其周围组织遭到破坏及引起炎症反应^[7-10]，造成受累关节的肿胀、功能障碍等。本实验研究中，与正常组比较，模型组功能障碍指数显著增加（P < 0.01），TNF-α及IL-1β含量增高（P < 0.05），说明MSU注射法能够通过MSU晶体沉淀于关节腔内引起关节炎症及活动障碍而成功制备AGA模型。选择性地抑制IL-1β，能够减轻痛风患者的疼痛及炎症反应^[10]，同样TNF-α的合成减少，能够抑制AGA的关节炎症反应^[11]，从而减轻关节破坏引起的症状。西药组、电针组与模型组比较，功能障碍指数显著降低（P < 0.01），TNF-α及IL-1β含量降低（P < 0.05），西药与电针治疗可改善AGA的关节炎症及活动功能，从而抑制AGA的病程进展。

TREM-1是近期发现的一个细胞表面受体，主要表达于单核细胞和中性粒细胞，在急性和慢性疾病中起着重要作用^[12]。TREM-1的结构分为胞外免疫球蛋白区、跨膜区和短胞质尾区，其胞外区可特异性地与其配体或单克隆体结合^[13]。目前，TREM-1的配体尚未明确，但已知TREM-1可与其未知配体结合，在外界因子的刺激下，诱导TNF-α等炎症介质的分泌，中性粒细胞的脱粒和吞噬反应等，使炎症部位中性粒细胞和单核细胞的生存时间延长^[14]。MSU能够诱导AGA大鼠腹膜中巨噬细胞和中性粒细胞中TREM-1的表达^[15]，且被激活的TREM-1能够诱导TNF-α、IL-1β等促炎因子的释放^[16]，而AGA关节炎症部位周围浸润着大量的巨嗜细胞及中性粒细胞等炎症细胞。本实验研究中，模型组大鼠踝关节组织TREM-1的表达明显高于正常组（P < 0.05）。由此可知，MSU诱导大鼠受试踝关节滑膜组织TREM-1出现高表达，可能通过增强其受试关节炎症的反应，进而促进了AGA大鼠模型的病情进展。TREM-1的表达同时受某些促炎因子及抗炎因子的影响，与其下游信号通路中的炎症细胞因子形成正反馈自分泌调节回路，因此，阻断TREM-1的信号通路可减轻炎症反应。而TREM-1的表达是非感染性炎症的一个重要标志^[17]，其表达量反映炎症反应的严重程度^[18]。本实验研究中，西药组与电针组TREM-1的表达量显著低于模型组（P < 0.05），可能是通过西药与电针治疗，降低了AGA大鼠模型踝关节组织TREM-1的表达，从而抑制了TREM-1的下游信号的转导，减轻了踝关节的炎症反应，最终抑制AGA的病情进展。有研究显示，TREM-1可作为类风湿关节炎的治疗新靶点^[2]，而本实验研究发现TREM-1的表达随着AGA病情改变而改变，故TREM-1亦可作为AGA治疗新靶点，为今后临床治疗AGA提供理论依据。

本实验研究揭示，西药与电针治疗AGA大鼠模型，能够改善受试关节功能障碍、降低其受试踝关节滑膜组织中的TREM-1的表达量，从而能起到一定的治疗效果。然而，西药组与电针组关节功能障碍指数、踝关节组织TREM-1的表达均无明显差异（P > 0.05），表明西药与电针对AGA大鼠的疗效无显著差异。通过临床观察发现，长期服用西药会出现恶心、呕吐，严重者出现骨髓抑制、肾功能衰竭甚至死亡等毒副作用，限制了其临床应用。电针治疗AGA，简便廉效，疗效显著，且副作用小，有着西药无可替代的地位。本实验研究揭示电针对AGA大鼠的治疗效果，为今后临床开展电针治疗AGA提供了理论依据，而电针对AGA大鼠的具体治疗机制还需进一步深入研究。