南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (2): 294-299.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.02.19
曾心靛,陈 利,周 鹏,唐 婷,陈 曦,胡 丹,王 川,陈丽丽
ZENG Xindian, CHEN Li, ZHOU Peng, TANG Ting, CHEN Xi, HU Dan, WANG Chuan, CHEN Lili
摘要: 目的 探讨鹦鹉热衣原体(Cps)SINC蛋白对宿主细胞自噬的影响,及MAPK/ERK信号通路在其中的调控作用。方法 用重组的SINC蛋白刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7),Western blot检测LC3-II和Beclin-1的水平及ERK1/2的磷酸化程度,并用间接免疫荧光法检测SINC蛋白刺激后细胞LC3的水平,透射电镜检测自噬特殊结构。用50 μmol MEK1/2抑制剂U0126预处理RAW 264.7细胞后1 h,再用不同浓度SINC蛋白刺激不同时间,用间接免疫荧光检测LC3的水平,并用Western blot检测LC3-II和Beclin-1的表达水平。结果 Western blot检测结果显示,以2 μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞12 h时,LC3-II和Beclin-1的表达水平显著上调,并达到峰值;间接免疫荧光检测发现SINC刺激后可使细胞内LC3荧光斑点数明显增多,透射电镜下可见更多的自噬小体和自噬溶酶体。2 μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞15 min时p-ERK1/2/ERK1/2比值明显上调;加入抑制剂U0126后,LC3-II和Beclin-1表达下调,LC3-II荧光斑点聚集减少。结论 SINC蛋白通过激活MAPK/ERK信号通路促进RAW 264.7细胞发生自噬。