南方医科大学学报 ›› 2022, Vol. 42 ›› Issue (6): 913-921.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2022.06.16
曹春浩,曾 丽,荣晓凤
CAO Chunhao, ZENG Li, RONG Xiaofeng
摘要: 目的 基于网络药理学方法,运用在线数据库研究大黄素治疗类风湿关节炎的作用机制,并在成纤维样滑膜细胞细胞系中进行验证。方法 通过Targetnet、SwissTargetPrediction、Genecards、DisGeNET和OMIM数据库,分别获得大黄素作用靶点及类风湿关节炎相关基因,并构建靶点蛋白质相互作用网络(PPI),对交集基因进行Gene Ontology与KEGG通路富集分析。运用AutoDock4.2.6软件模拟分子对接。将大黄素与经TNF-α诱导的MH7A细胞共同培养,培养分组情况:空白对照组、模型组(TNF-α组,10 ng/mL)、药物干预组(TNF-α 10 ng/mL+Emodin20、40、60、80、100 μmol/L)。采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞周期实验探究大黄素对MH7A细胞增殖的抑制作用。通过Western blot观察其NF-κB通路蛋白表达情况,通过Rt-PCR实验分析 CAPS3、PTGS2(COX2)、MAPK14 基因的表达。结果 获得大黄素和类风湿关节炎交集基因32个,其中心节点为CAPS3、ESR1、MAPK14等,主要涉及NF-κB信号通路等。分子对接提示大黄素与核心靶点能较好的结合。实验结果显示,大黄素能明显抑制MH7A细胞过度增殖(P<0.05)。Western blot结果显示,TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB 蛋白表达水平升高(P<0.01),而予以大黄素80 μmol/L干预后IκBα、p-NF-κB表达水平均有所降低(P<0.01)。Rt-PCR结果显示,TNF-a组COX2、 P38MAPK(MAPK14)核心基因的表达量明显上调,而大黄素(80 μmol/L)处理后各组COX2、P38MAPK14的mRNA表达下降mRNA的表达下降(P<0.01),凋亡相关基因CASP3上调。结论 大黄素通过调控细胞增殖凋亡,调节NF-κB等信号通路等发挥治疗类风湿关节炎作用。