摘要: 目的建立大体积直接进样的限进性液相色谱(RAM-HPLC)法,实现脑脊液样品的在线直接进样富集并检测脑脊液中的
利福平。方法以自制限进性填料柱为前处理柱,Luna C18为分析柱,前处理流动相为水―甲醇(95∶5,V/V),流速为1 mL/min,分
析流动相为甲醇-乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(60∶5∶35,V/V/V),柱温为25 ℃,检测波长为254 nm。结果选择100 μL为进样体
积,其峰面积是进样量为20 μL时的5.33倍,有效提高了HPLC的检测灵敏度。利福平在0.25~8 μg/mL的浓度范围内浓度和峰
面积具有良好的线性关系(r=0.9997),LOD和LOQ分别为0.07 μg/mL和0.25 μg/mL,日内日间精密度均小于5%,低中高3个浓
度下的空白加样回收率为87.69%~102.11%,测定给药(剂量为10 mg/kg)2 h后的人脑脊液中利福平浓度为0.29 μg/mL。结论
该方法简单快速,适用于脑脊液中利福平的富集检测,满足临床个体化用药指导。