摘要: 目的为研究人肝癌细胞系HepG2 线粒体DNA(mtDNA)缺失后的放射生物学特性,建立并鉴定mtDNA缺失HepG2
(ρ0HepG2)细胞系。测定辐射干预下mtDNA缺失(Rho0)肝癌细胞的凋亡情况、侵袭能力以及辐射敏感性的变化。方法在含
有溴化乙锭(EB)、丙酮酸、尿嘧啶的特殊培养基中培养HepG2 细胞,经30 次传代后,有限稀释法筛选完全去除mtDNA的克
隆。去除丙酮酸及尿嘧啶后,观察细胞的存活情况。PCR法鉴定mtDNA的缺失。用6MvX射线梯度剂量照射HepG2 细胞
和ρ0HepG2细胞,平板克隆法绘制生长曲线,线性二次方程拟合生存曲线,计算α/β。2Gy剂量辐射细胞,24 h后用Hochest33342
细胞核染色,比较HepG2细胞与ρ0HepG2凋亡率的差异。用Transwell法测定两种不同细胞的侵袭能力。结果在含EB特殊培
养环境下,HepG2细胞可持续生长传代至30代,去除丙酮酸和尿嘧啶后,细胞短时间内大量死亡。经PCR法证实mtDNA完全
缺失。ρ0HepG2细胞α/β显著低于正常HepG2细胞,辐射抵抗能力增强。辐射干预后ρ0HepG2的凋亡比例显著减少。ρ0HepG2
穿膜细胞数显著增多。结论在EB长期诱导下,HepG2肝癌细胞可被成功诱导为mtDNA缺失细胞。ρ0HepG2细胞的辐射抵抗
性显著增强,抗凋亡能力及侵袭能力均提高。