摘要: 目的采用多肽制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体,为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学
分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank 获得大鼠钠泵α2 亚单位M1~M2 膜外区截断性片段目的多肽
(LAAMEDEPSNDN),采用9-氟甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成目的多肽,并采用碳化二亚胺法制备出多肽与孔戚血蓝素复
合物,免疫新西兰大白兔,免疫4次后获得抗血清,测定其效价。随后采用protein A纯化IgG抗体,并将其用于大鼠主动脉血管
平滑肌细胞钠泵α2 亚单的组织学检测。结果(1)人工合成的大鼠钠泵α2 亚单位截断性片段长13 氨基酸残基
(LAAMEDEPSNDN-C),理论相对分子质量:1408.48,质谱实测相对分子质量:1407.90;高效色谱分析纯度HPLC纯度>85.5%;
(2)ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1∶512 000,蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml,按照1∶
1000稀释(终浓度1 μg/ml),ELISA检测抗体效价为1∶256 000;(3)该抗体按照1∶100~1∶200稀释可用于免疫细胞学检测。结
论成功制备高效价抗钠泵α2亚单位截断性片段抗体可用于钠泵α2亚单位的ELISA和免疫细胞化学实验,为钠泵α2亚单位的
组织细胞学检测和功能研究提供新的实验基础。