摘要: 目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5’UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因
转染技术,将截短型HCV 5’UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒pRL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h:
①提取细胞RNA,半定量RT-PCR 检测目的质粒的转录水平;②用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc 基因相对表达活
性,分析HCV 5’UTR缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。结果⑴缺失5’端44 个碱基的HCV 5’UTR
的翻译启动活性分别与缺失前相比:在HeLa细胞和C6细胞中无明显影响,在L-02细胞中活性下降为46%,而在293T细胞则为
缺失前的146%;⑵缺失5’端118个碱基后,HCV 5’UTR的活性分别与缺失前相比:在HeLa细胞中,缺失后活性仅为缺失前的
49%,而在L-02细胞、C6细胞和293T细胞中,活性分别为缺失前的140%、160%和235%。在本研究使用的四种细胞中,pCNl的
翻译启动活性的差异无统计学意义,pCNl-d2在293T细胞中活性最高,在L-02细胞中活性最低。pCNl-d3在293T、C6和L-2细
胞中活性相近,但在HeLa细胞中的活性明显比其他细胞低。结论HCV 5’UTR的DomainⅠ和DomainⅡ对其翻译启动活性的
影响与宿主细胞种类相关,具细胞特异性。