摘要: 目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌
细胞株中mir-101 的表达水平。利用GV209-mir101 慢病毒感染SW620 细胞,建立稳定过表达mir-101 的细胞株。扩增包含
mir-101 结合位点的RAC1 3’UTR 基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2 载体,对此重组载体进行定点突变构建
psiCHECK-2-Rac1-Mut;并用双萤光素酶报告实验检测RAC1 3’UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株
中,mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3’UTR相对荧光素酶活性。稳定过
表达mir-101,RAC1表达下调;而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。
RAC1是mir-101的靶基因。