摘要: 目的通过表型和基因型分析方法,初步了解造血干细胞移植术后巨细胞病毒(HCMV)感染患儿的耐药情况。方法采用
人包皮成纤维细胞培养分离并鉴定HCMV临床株;Reed.Muench 法测定其半数组织培养感染量(TCID50),空斑减数实验测定
病毒对丙氧鸟苷的敏感性,同时以HCMV UL97 基因为靶序列,用Nested-PCR 扩增目的基因,并对PCR产物做直接序列测
定。结果成功从患者尿标本中分离出HCMV临床病毒株,测得其TCID50为:10-4.618/0.1 ml;IC50值为5.847 μmol/L,对丙氧鸟苷
高度敏感;同时基因序列与AD169株的序列相比较,发现四个位点发生碱基突变,分别是1509 T→C、1575 C→T、1794 T→C、
1815 C→G;上述突变的编码子分别为503,525、598 和605,前3 个位点的突变未导致相应氨基酸改变,第四个位点氨基酸则改
变为D605E,未发现与耐药有关的基因突变。结论初步建立造血干细胞移植后HCMV耐药表型和基因型检测的实验方法,本
次试验从临床标本中尚未发现HCMV耐药现象。