摘要: 目的获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG 样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活
性。方法利用RT-PCR法从孕龄14 d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载
体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D1-4。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,
目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测
该融合蛋白对血管内皮生长因子(VEGF)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的阻断作用。结果测序结果证实成功扩增出目
的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D1-4 原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化
出大小与预期一致的蛋白;Western blotting 证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应;ELISA 检测显示纯化后的
mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用。结论成功获
得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免
疫治疗奠定了基础。