南方医科大学学报 ›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (12): 1741-.

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RNA干扰抑制CD133 表达对CD133+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响

兰曦,王勇,曹姝,邹冬玲,李芳,李少林   

  • 出版日期:2012-12-20 发布日期:2012-12-20

Lentivirus-mediated RNA interference of CD133inhibits the proliferation of CD133+ liver cancer stem cells and increases their cisplatin chemosensitivity

  • Online:2012-12-20 Published:2012-12-20

摘要: 目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+
HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+
HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验
鉴定其“干性”;随后以CD133mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和
Western Blot检测CD133mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药
物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为(3.36±1.80)%,( 88.74±3.19)%;
CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133shRNA后的细胞CD133mRNA表达明显受到
抑制(P<0.05),蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降(P<0.01)。顺铂对转染CD133shRNA后细胞生长抑制作用明显提高(P<
0.01),且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基
因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。