摘要： 摘要：目的构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12，GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB，验证以
上免疫调节因子基因在293T 细胞的表达以及IL-12 基因在活体内的表达。方法将人IL-12 基因克隆到早期构建好的
pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游，将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒；利用脂质体法瞬时转染293T细胞，
RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7.1基因的转录，ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达，流
式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达；利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌，免疫组化法检测IL-12基因在小
鼠活体内的表达情况。结果双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致，测序分析证实IL-12基因序列完全正
确；瞬时转染293T细胞后，分别验证了人IL-12，GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达；电穿孔递送质粒后，活体肌肉
组织内同样可以检测到IL-12基因的表达。结论成功构建了可以同时表达人IL-12，GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治
疗剂，为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础。