南方医科大学学报 ›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (05): 614-.

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人甘油激酶慢病毒干涉载体的构建和表达

刘悦,郝玉娥,詹轶群,许望翔,杨永升,葛常辉   

  • 出版日期:2012-05-20 发布日期:2012-05-20

  • Online:2012-05-20 Published:2012-05-20

摘要: 摘要:目的构建人甘油激酶(GK)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,获得稳定下调GK表达的慢病毒。方法将具有干涉效果
的siRNA序列克隆入慢病毒核心质粒pSicoR中,并转染293T细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T细胞并应用FACS测定病
毒滴度。以GK干涉慢病毒感染人肝细胞系L02细胞后,应用Western blotting方法检测GK的表达。结果成功构建GK干涉
慢病毒pSicoR-GK载体并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达3×107 pfu/ml,GK蛋白质表达水平下调至对照的约20%。结论
成功构建人GK基因RNAi慢病毒,为后续GK生物学功能研究奠定基础。