摘要： 摘要：目的评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒（HBV）耐药基因检测中的敏感与特异性。方法选取rtM204I
（ATT）突变型和rtM204（ATG）未突变型质粒，按照不同比例混合后，采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测，并
与常规PCR焦磷酸测序法进行比较，对两种方法的线性及一致性进行分析；选取不同病毒载量临床标本，采用巢式PCR焦磷酸
测序法检测耐药突变位点，并与巢式PCR Sanger测序法进行比较，对两种方法的敏感性及特异性进行分析。结果常规PCR焦
磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2>0.99，P<0.05，线性模型有显著性意义。分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式
PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析，巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值，在90%比例处优于常规PCR。
临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示，Sanger测序的灵敏性为92%，巢式
PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100%，差异有统计学意义(P<0.01)。对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同，其差异主要
表现在低浓度组（HBV DNA≤3log10 copies/ml），Sanger测序的灵敏性为78%，而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100%，差异有
统计学意义(P<0.01)。阴性对照，两种方法均未检出HBV病毒，两种方法的特异性均较好。结论巢式PCR联合焦磷酸测序的
方法监测乙肝病毒变异同巢式PCR联合sanger测序相比，有更好的灵敏性，尤其是在低病毒拷贝数时，差异明显，这对于临床提
早发现耐药突变株，指导临床及时更换用药有重要意义。