摘要： 摘要：目的构建p38 丝裂原激活蛋白激酶基因（MAPK）重组慢病毒载体并建立表达外源性p38 基因的人前列腺癌稳定细胞
株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA 连接酶连接等方法，将EGFP/p38 融合基因插入慢病毒载体pTYFEF1α-
IRES-EGFP中，构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38，经酶切鉴定后，利用慢病毒
三质粒系统，通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞，收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株，经有限稀释法筛选
重组EGFP/p38稳定细胞株，用Western blotting检测细胞总p38的表达，用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定，成
功构建EGFP/p38重组慢病毒载体，并包装慢病毒，检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml，利用此病毒悬液感染DU145细胞，成
功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株，Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白，这种过表达p38的
细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定
细胞株EGFP/p38-DU145，细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。