摘要： 接要：目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体
序列在内的基因片段，并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体；扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至
psiCHECK-2载体，并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut；检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R)，
以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株，利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因
RASA1的表达，Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-
RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负
相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3’UTR。稳定过表达miR-335的细胞中，miR-335的表
达明显高于对照组和未处理组，蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335 慢病毒重组质粒，构建过表达
miR-335的细胞株SW620，初步证实RASA1是miR-335的靶基因。