摘要： 摘要：目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠（VitC Na）介导的凋亡作用。方法常规在75 cm2培养瓶中
培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10，待细胞长至90%~95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液，用PBS反复清洗后加入无血清的
DMEM/高糖10 ml在培养箱中培养6~8 h，收集培养液用2500 r/min离心5 min后上清用0.22 μm滤器过滤，-20 ℃保存备用，在
6孔板中每孔接种1×106 B16F10，常规培养24 h后，实验组每孔加入2 ml条件培养液（含有10%胎牛血清），对照组用普通培养
液，两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡，分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况，hoechst染核，收集细胞免疫荧光检测caspase3和
TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分，分别煮沸，用蛋白酶K
灭活后对B16F10 促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na 介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10 凋亡，抗凋亡成分小
于5 000，且不能被煮沸和蛋白酶K灭活，提示其是小分子抗凋亡物质。结论B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。