摘要： 摘要：目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术，有效沉默黑色素瘤细胞株UACC903 巢蛋白（nestin）的表达，研究其对黑色素瘤
细胞转移能力的影响。方法以人nestin mRNA编码序列作为干扰靶点，以慢病毒基因PLL3.7 作为质粒载体，构建靶向人
nestin的shRNA表达质粒，另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒，分别感染UACC903细胞并流式分选获
得高纯度的nestin 干扰或对照组细胞。应用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting 检测不同组别nestin 表达的变化。分别用
Transwell侵袭试验检测跨膜细胞的数量评估各组黑色素瘤细胞的侵袭能力，划痕法检测迁移能力改变。光镜观察各组细胞形
态变化，免疫荧光检测E-cadherin、N-cadherin 和β-catenin 在不同组别的表达变化。结果成功构建nestin shRNA慢病毒载体
nestin-RNAi-LV。RT-PCR 及免疫荧光结果显示干扰组UACC903 细胞nestin mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低。
nestin下调的UACC903细胞黏附、侵袭及迁移能力下降（P<0.05）。结论慢病毒介导的shRNA 能有效地静默食管癌细胞nestin
基因的表达，能抑制黑色素瘤细胞UACC903迁移。