摘要： 摘要：目的构建来自华南不同慢性丙型肝炎（CHC）患者的HCV NS5A的复制子重组质粒并测序分析，探索HCV NS5A在抗病
毒应答中生物学特性。方法以能够高效复制的1b型HCV复制子质粒为骨架，构成带有MIuⅠ和BclⅠ双酶切位点的开关质
粒，采用逆转录-聚合酶链反应从不同CHC患者血清中扩增获得HCV 1b亚型NS5A全长片段，克隆到pMD-18载体中，测序分
析其中的PKRBD、ISDR、V3和IRRDR区域的变异情况。扩增产物中无MIuⅠ和BclⅠ酶切序列的，在引物中引入相关酶切序
列后再扩增，双酶切后将NS5A区段置换入HCV 1b复制子骨架中。结果成功扩增出NS5A全长片段并克隆测序，将NS5A区
ISDR-V3区域置换入复制子中，测序结果正确。序列比对显示应答株的ISDR和PKRBD氨基酸变异数目比无应答株高；V3和
IRRDR区域存在较高氨基酸突变率。结论成功构建包含华南HCV 1b亚型NS5A核心区域的复制子插入式重组质粒，为研究
HCV NS5A生物学特性、干扰素抵抗的机制以及难治性CHC患者的个体化抗病毒治疗分析奠定了基础。