南方医科大学学报 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (12): 2002-.

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黄粉虫抗菌肽Tenecin基因的克隆、原核表达及其抑菌活性

刘影,姜玉新,李朝品   

  • 出版日期:2011-12-20 发布日期:2011-12-20

  • Online:2011-12-20 Published:2011-12-20

摘要: 摘要:目的为研究黄粉虫体内抗菌肽表达调控的分子机制,克隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并研究其原核表达产物的抑
菌活性。方法用大肠杆菌DH-5α菌液(1×108/ml)腹部注射黄粉虫5龄幼虫,72 h后提取其总RNA,RT-PCR克隆Tenecin
基因,测序并进行生物信息学分析;构建原核表达重组载体pET-28a(+)-Tenecin并转入大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导
观察其表达情况;将4种不同浓度的原核表达产物Tenecin蛋白作用于大肠杆菌DH-5α,测量抑菌圈直径大小,观察其抑菌
作用。结果电泳及测序结果显示:Tenecin基因的大小为255 bp左右;用1 mmol/L IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳检测
在9 000附近有目的条带,与理论值大小相符;体外抑菌试验表明:试验设3个重复,浓度为80、60、40、20 μg/ml的Tenecin
蛋白与大肠杆菌DH-5α共培养18 h后,抑菌圈直径(mm)分别为25.1±0.03、20.7±0.06、17.2±0.11、9.3±0.04。结论成功克
隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并成功表达Tenecin蛋白,该蛋白对大肠杆菌DH-5α有明显抑制作用,为后期临床应用奠定
基础。