摘要： 摘要：目的构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体，通过RNAi下调Akt基因在结肠癌Lovo细胞系中的表达，观察
对结肠癌细胞生长的影响。方法将靶向人Akt基因的两条shRNA（Akt1-U6-1#；Akt1-U6-2#）表达序列克隆到入门载体
pENTRTM/U6的黏性末端，测序鉴定后与目的表达载体Plentio/Block-iT DEST Vector进行LR位点特异性重组；分别将
入门载体与目的表达载体转染入Lovo细胞，对细胞株行RT-PCR和Western blotting检测，观察siRNA对靶基因Akt的抑
制效果。结果DNA测序证实pENTRTM/U6-TF-shRNA入门载体和Plentio/Block-iT DEST 目的表达载体为阳性克隆,转
染Lovo细胞后，Akt基因在mRNA和蛋白水平的表达量受到明显抑制。结论成功构建了靶向人Akt的shRNA表达载体,
且该载体在体外能有效抑制Lovo细胞Akt基因表达，为进一步研究Akt的功能和肿瘤的基因治疗奠定了实验基础。