南方医科大学学报 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (11): 1867-.

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蛋白激酶C激活的荧光共振能量转移分析

李俊青,江建明,冯瑞强,蒋晖,闫文娟,杨德鸿   

  • 出版日期:2011-11-20 发布日期:2011-11-20

  • Online:2011-11-20 Published:2011-11-20

摘要: 摘要:目的当前,检测蛋白激酶C(PKC)激活的方法尚缺乏灵敏性或直接性,这里我们提供了一种新的直接而灵敏的方
法——利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术来构建检测PKC激活的方法。方法将
表达PKC激活的报告分子(CKAR)的质粒单独转染或与表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒共转染HEK293细胞,
培养72 h 后用激光共聚焦显微镜检测FRET的变化,并以此判断甲状旁腺素或佛波酯是否激活PKC。结果在只转染
CKAR质粒的HEK293 细胞,佛波酯降低了CKAR分子的FRET效率,并使青色荧光与黄色荧光的比值(C/Y)增加,而
PTH(1-34)未能改变C/Y 的值。在共转染了CKAR和PTHR1 质粒的HEK293 细胞,PTH(1-34)则使C/Y 增加。结论
PKC激活报告分子可用于检测PKC的激活,该方法也可作为PKC相关信号转导的实验平台。