南方医科大学学报 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (09): 1600-.

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慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响

关婧,孙爱民,王莉慧,何美蓉   

  • 出版日期:2011-09-20 发布日期:2011-09-20

  • Online:2011-09-20 Published:2011-09-20

摘要: 摘要:目的探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)沉默APRIL基因对大肠癌细胞株LOVO化疗敏感性
的影响。方法实验分为3 组:siRNA-APRIL组、非特异性序列组和空白对照组。制备siRNA-APRIL慢病毒表达载体,
PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。转染LOVO细胞48 h后,Western blot检测LOVO细胞的APRIL表达水平;同时用10 μg/ml
5-FU处理细胞,5-FU作用72 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果
PCR和测序证实,成功构建siRNA-APRIL慢病毒表达载体。Western blot检测表明siRNA - APRIL组的APRIL表达水平
下调。5-FU处理LOVO细胞后,流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(21.12±3.35)%、(13.06±1.92)% 和(12.28±1.79)%,
siRNA-APRIL组显著高于另两组(P<0.01),且G0/G1期细胞增多,G2/M期细胞减少(P<0.05);MTT法检测显示各组的增
殖抑制率分别为(59.67±5.03)%、(42.33±4.16)%、和(39.67±4.73)%,siRNA - APRIL组显著高于另两组(P<0.01)。结论以
APRIL为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株LOVO中的APRIL表达,增强其对5-FU的化疗敏感性。