摘要： 摘要：目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体，观察其对
CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序
列，定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1·KNOB△HI，同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制
性酶切位点。在此基础上，用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像
分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1，pShuttle-GFP在E. coli BJ5183中同源重组，得腺病毒载体
Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480，通过荧光显微镜观察
感染效率。结果降落PCR 和重叠延伸PCR 都扩增出特异性条带，测序结果与预期相符。与Ad5-GFP 相比，
Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干
细胞的腺病毒载体，利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体，其对CD133+人大肠癌细胞株
SW480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。