南方医科大学学报 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (08): 1396-.

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人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖

许茹,夏文杰,戎霞,叶欣,邵媛,王敏,罗广平,付涌水   

  • 出版日期:2011-08-20 发布日期:2011-08-20

  • Online:2011-08-20 Published:2011-08-20

摘要: 摘要:目的探讨人血小板裂解液(human platelet lysates, HPL)对骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)增殖以
及生物学特性的影响。方法通过对机采血小板反复冻融获得HPL,采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs,分别用
10%胎牛血清(feotal calf serum, FCS)和LD-DMEM添加不同浓度的HPL进行培养,以确定最佳HPL浓度。分离6株人源
MSCs,从原代开始分别用添加胎牛血清和最佳HPL浓度的LD-DMEM进行培养,对两种培养体系下6 株不同来源的
MSCs的增殖能力,表面标记表达量以及细胞周期进行研究,并利用t-test进行统计学分析,P<0.05视为有统计学差异。结
果研究发现HPL中含有MSCs生长所必需的4种生长因子,PDGF-AB(人血小板衍生生长因子AB),bFGF(成纤维细胞
生长因子),IGF-1(胰岛素样生长因子1),TGF-β1(转化生长因子β1), 浓度分别为:(0.53±0.06)ng/ml,(37.5±4.31)pg/ml,
(0.15±0.06)mg/ml,(5150±463)pg/ml。适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5% 。两种培养条件下的细胞形态无明显
区别,均为长梭形。8代以前,细胞增殖能力没有显著性差异(P>0.05),两种培养条件下的MSCs均表达CD105,CD106以
及粘附分子CD29 和CD44,不表达CD34,CD45,且其表达量没有显著性差异(P>0.05)。两种培养体系下绝大多数细胞
处于G0-G1期,FCS培养的MSCs其G0-G1期占(96.97±0.95)%,7.5%的HPL培养的MSCs其G0-G1期占(94.58±1.56)%,两
种培养条件下不同周期没有显著性差异(P>0.05)。结论本研究适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5%,HPL 可以替代
胎牛血清体外培养扩增人骨髓间质干细胞,并保持其生物学特性基本不变。