摘要： 摘要：目的通过基因工程技术制备结核分枝杆菌培养滤液蛋白10（CFP10）、链亲和素（SA）/CFP10 融合蛋白（包括
SA-CFP10、CFP10-SA)，筛选灵敏度最高、稳定性最好者作为时间分辨荧光免疫分析法检测（TRFIA）的参考标准品。方
法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组为模板，扩增CFP10基因，将其克隆到pET24b、pET24b-SA、pET21a-SA三种载
体中，转化到大肠杆菌Rosetta中进行表达，表达产物经镍离子亲和层析（Ni-NTA）柱纯化，透析法复性。三种重组蛋白用
双抗体夹心法TRFIA 从灵敏度、稳定性两方面进行评价。结果成功构建了pET24b-CFP10、pET24b-SA-CFP10 和
pET21a-CFP10-SA三种表达载体，重组蛋白CFP10主要为可溶形式表达，融合蛋白CFP10-SA、SA-CFP10均以包涵体形
式存在，Ni-NTA柱纯化后透析复性，纯度均可达90%以上。三种重组蛋白经双抗体夹心TRFIA，CFP10-SA灵敏度最高
（0.02 μg/L），稳定性最好。结论得到了灵敏度高、稳定性好的TRFIA检测CFP10的参照品CFP10-SA融合蛋白，为研制
该结核分支杆菌时间分辨荧光诊断试剂盒，并应用于临床打下了基础。