摘要： 摘要：目的构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV) YMDD点突变的复制质粒，研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性。方
法以广东樱桃谷鸭DHBV 分离株为模板，将3631 bp的片段克隆至载体pBluescript II KS(+)中，构建含1.2倍病毒全基因
的重组质粒，经PCR定点突变获得YMDD突变株。将构建质粒经FuGENETM 6 瞬时转染鸡肝癌细胞，分析变异株的复
制能力及拉米夫定耐药性。结果PCR 鉴定、酶切鉴定及序列测定均证实成功获得1.2 倍DHBV全基因YMDD突变质
粒。Southern印迹杂交表明重组质粒转染细胞后可检测到病毒复制中间体；野生株的复制能力是突变株的2.7倍。拉米
夫定对变异株的IC50=37.12±8.81 ng/ml，高于野生株的IC50=10.90±4.80 ng/ml。结论与野生株相比，YMDD突变株质粒
体外复制活性减弱，对拉米夫定敏感性下降。