南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (11): 1609-.
杨翠兰; 赵文忠; 刘艳君; 朱平; 富宁;
YANG Cui-lan1,ZHAO Wen-zhong2,LIU Yan-jun1,ZHU Ping1,FU Ning1 1Department of Immunology,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China;2College of Basic Medicine,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China
摘要: 目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1~153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接ELISA检测抗体特异性及效价。结果成功构建了融合表达载体pET-N,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pGEX-N表达的融合蛋白反应,并可结合表达TLR-2的RAW264.7及转染mTLR-2全长基因的CHO细胞。结论获得了mTLR-2N末端重组融合蛋白及其可与天然mTLR-2结合的多克隆抗体。
中图分类号: