南方医科大学学报

南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (09): 1356-.

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微孔杂交检测登革病毒及其分型方法的建立

任瑞文； 徐晓立； 李建军； 方美玉； 刘建伟； 马安德；   

  1. 广州军区疾病预防控制中心； 南方医科大学分析测试中心； 南方医科大学分析测试中心 广东广州510507； 广东广州510507； 广东广州510515；
  • 出版日期:2006-09-20 发布日期:2006-09-20

Detection and typing of dengue virus using polymerase chain reaction and microwell plate hybridization

REN Rui-wen1, XU Xiao-li1, LI Jian-jun2, FANG Mei-yu1, LIU Jian-wei1, MA An-de2 1Disease Control and Prevention Center of Guangzhou Command, Guangzhou 510507, China; 2Instrumental Analysis and Research Center, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China   

  1. 广州军区疾病预防控制中心； 南方医科大学分析测试中心； 南方医科大学分析测试中心 广东广州510507； 广东广州510507； 广东广州510515；
  • Online:2006-09-20 Published:2006-09-20

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摘要： 目的建立特异、敏感、实用的登革病毒检测及分型方法。方法分析登革1￣4型病毒基因组序列,分别设计针对登革病毒1￣4型的特异性包被探针,扩增、克隆测序后包被聚乙烯微孔板。PCR上游引物5’端标记生物素,对待检样品进行扩增后用作检测探针进行微孔杂交(PCR-ELISA)反应,并通过设定不同的包被DNA浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间,对PCR-ELISA反应进行优化。结果建立了快速、特异、敏感的登革病毒快速检测及分型方法,试验结果直观,阳性标本吸光度值在0.5以上,阴性结果吸光度值在0.1以下,S/N值在10以上。结论所建立的方法可用作登革病毒感染的早期诊断及分型。 

Abstract: Objective To establish a specific, sensitive and practicable method for detection and typing of dengue virus. Methods Based on the genomic sequence analysis of dengue virus types 1-4, 4 pairs of primers were designed. The specific capture probes of dengue virus types 1-4 were amplified using RT-PCR, cloned and sequenced before using them for precoating the microwell plate. The samples were amplified using biotin-labeled forward primer and reverse primer, and microwell plate hybridization was carried out for detection and typing of dengue virus types 1-4. Results The absorbance of the positive samples were higher than 0.5, while the average absorbance of the negative samples was lower than 0.1, with the S/N higher than 10. Conclusion The method of PCR-ELISA we established for early detection and typing of all 4dengue viruses seretypes. 

中图分类号: