南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (09): 1280-1283.
邢锐; 杨晓强; 陈学清; 张振书;
XING Rui, YANG Xiao-qiang, CHEN Xue-qing, ZHANG Zhen-shu Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China
摘要: 目的构建带c-myc分子标签的人三叶因子家族2(hTFF2)融合基因c-myc-hTFF2的乳酸链球菌表达载体,以便进一步构建能表达活性c-myc-hTFF2融合蛋白的乳酸链球菌工程菌。方法根据hTFF2的氨基酸表达序列和乳酸链球菌的氨基酸密码子,以c-myc作为分子标签,设计c-myc-hTFF2的cDNA序列,并在其5’端和3’端添加SalI和BamHI酶切位点;将目的基因片段设计成14个相互互补的寡核苷酸,经聚合酶链式反应,得到目的基因c-myc-hTFF2;将c-myc-hTFF2连入pBluescriptIIsk(+)载体,构建其克隆载体pBS-TFF2并进行酶切鉴定及DNA测序;分别用SalI/BamHI和XhoI/BamHI对pBS-TFF2和pNBC1000进行双酶切反应,再通过连接反应将c-myc-hTFF2融合基因插入pNBC1000,构建c-myc-hTFF2大肠杆菌表达载体(pNTFF2);用XbaI对pNTFF2和穿梭载体pTRKH2单酶切反应,并通过连接反应将c-my-hTFF2的表达载体连入穿梭载体pTRKH2,完成乳酸链球菌表达载体pTRTFF2的构建,并进行酶切鉴定。结果成功构建了c-myc-hTFF2的乳酸链球菌表达载体pTRTFF2。结论体外基因拼装是构建目的基因有效的方法;pTRTFF2的构建为构建乳酸链球菌工程菌奠定了基础。
中图分类号: