南方医科大学学报

南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (04): 466-468.

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新型Taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR检测人类mdr1基因

邹亚伟； 封志纯； 胡斌； 乔英飒； 吴梓梁； 陈福雄； 叶铁真；   

  1. 广州医学院第一附属医院儿科； 南方医科大学珠江医院儿科； 中山大学达安基因诊断中心； 广州医学院第一附属医院儿科 广东 广州 510120； 广东 广州 510282； 广东 广州 510089； 广东 广州 510120；
  • 出版日期:2006-04-20 发布日期:2006-04-20
  • 基金资助:
    广东省医学科学技术研究基金(2005288)~~

Detection of mdr1 gene by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction using Taq Man-MGB probe

ZOU Ya-wei, FENG Zhi-chun, HU Bin, QIAO Ying-sa, WU Zi-liang, CHEN Fu-xiong,YE Tie-zhen Department of Pediatrics, First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120, China; DaAn Gene Diagnostic Center, Sun Yat Sen University, Guangzhou 510089, China; Department of Pediatrics, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510282, China   

  1. 广州医学院第一附属医院儿科； 南方医科大学珠江医院儿科； 中山大学达安基因诊断中心； 广州医学院第一附属医院儿科 广东 广州 510120； 广东 广州 510282； 广东 广州 510089； 广东 广州 510120；
  • Online:2006-04-20 Published:2006-04-20

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摘要： 目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以Taq Man-MGB探针技术为基础,运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1／A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝／反应,在待扩增DNA浓度为3．061×103 cps／ml-3．061×109cps／ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0．988243。结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。

Abstract: Primer Express 2.0 software was used to design the primers and the MGB probe. With the plasmid pHaMDR1/A containing mdr1 cDNA as the template, we established a real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction system, which, at the template concentration of 3.061×103 to 3.061×109 cps/ml, had a correlation coefficient of 0.988243 between template concentration and threshold cycle value. This PCR method allows sensitive, specific and quantitative detection of human mdr1 gene. 

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