南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (03): 261-265.
王淑辉; 张成; 陈松林; 于美娟; 张雅妮; 李美山; 熊符; 尚延昌; 冯善伟; 申本昌;
WANG Shu-hui1,ZHANG Cheng1,2,CHEN Song-lin1,YU Mei-juan2,ZHANG Ya-ni1,LI Mei-shan1,XIONG Fu2,SHANG Yan-chang1,FENG Shan-wei1,SHEN Ben-chang1 Department of Neurology,First Affiliated Hospital1,Center of Stem Cell Research and Tissue Engineering2,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China
摘要: 目的构建人微小抗肌萎缩蛋白基因(microdystrophin)的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究其体外表达情况。方法限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)的NotI位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3.1(+)/micro dystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入rMSCs中,经过G418筛选后,用RT-PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果pcDNA3.1(+)/micro dystrophin经过NotI、Hind III酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录;对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光,说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染入rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达,为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。 更多还原
中图分类号: