南方医科大学学报 ›› 2005, Vol. 25 ›› Issue (05): 538-541.
吴锦雅, 杨培良, 周晓红, 李华, 陈晓光
WU Jin-ya, YANG Pei-liang, ZHOU Xiao-hong, LI Hua, CHEN Xiao-guang
摘要: 目的 建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法 将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L~2.82×10-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:时,检测效果最佳.对rSjp38的最低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、、5、6周小鼠血清,阳性率分别为0%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论 通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.
中图分类号: