南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (9): 1536-1547.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.09.11
张 倩，张梅奎，刘颖璐，王 妍，吕菲菲，王毓国
ZHANG Qian, ZHANG Meikui, LIU Yinglu, WANG Yan, LV Feifei, WANG Yuguo
摘要： 目的 基于网络药理学探索六味酸枣汤治疗围绝经期失眠的作用机制，并运用分子对接和动物实验进行验证。方法 借助TCMSP 和 Batman-TCM 数据库检索六味酸枣汤的活性成分和作用靶点，并构建“中药-活性成分-靶点”网络。以“Perimenopausal Insomnia”为关键词在OMIM、Genecards和Gene数据库获取疾病靶点。将共同靶点导入STRING 数据库和Cytoscape软件筛选核心治疗靶点，借助DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG通路分析。利用AutoDock对六味酸枣汤主要活性成分与核心靶点进行分子对接实验，同时以动物实验验证结果。取48只大鼠随机分为假手术组（8只）和造模组（40只），采用双侧卵巢切除术和对氯苯丙氨酸腹腔注射建立PI模型。将造模组大鼠随机分为模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组，分别予以生理盐水10 mL/kg、唑吡坦10 mg/kg以及六味酸枣汤9.0、18.0、36.0 g/kg灌胃，连续8 d。末次给药后进行戊巴比妥钠协同的翻正反射实验，记录各组睡眠潜伏期和睡眠时长，ELISA法测定血清雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素等激素水平，WB和PCR法分别检测下丘脑组织中ESR1与SIRT1的蛋白及mRNA水平。结果 共筛选出六味酸枣汤活性成分99个，药物靶点389个，PI相关靶点187个，药物与PI共同靶点15个；核心活性成分主要为亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等，核心靶点包括ESR1、SIRT1、SERPINE1、COMT和CCL2等。GO分析结果主要包括RNA聚合酶II启动子对转录的正向调节、对药物的反应和转录的正向调节等生物学过程；KEGG富集通路包括多巴胺能突触途径和酪氨酸、色氨酸代谢等。分子对接结果显示六味酸枣汤主要活性成分与ESR1、SIRT1和SERPINE1有较好的结合能，与酒石酸唑吡坦相当。动物实验表明，六味酸枣汤可有效改善大鼠失眠症状（P<0.01），调节雌激素等HPO轴相关激素水平（P<0.05），促进ESR1和SIRT1的蛋白与mRNA表达（P<0.01）。结论 六味酸枣汤可能通过亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等多种活性成分协同调控ESR1、SIRT1和SERPINE1等基因表达，进而达到治疗围绝经期失眠的效果。
