南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (8): 1363-1370.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.08.13
柳丽丹,钱立元,李珮婷,李 俊,黄 珊,易文君,柳双喜,吴 唯
LIU lidan, QIAN Liyuan, LI Peiting, LI Jun, HUANG Shan, YI Wenjun, LIU Shuagnxi, WU Wei
摘要: 目的 探索继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)中引起钙敏感受体(CaSR)低表达的miRNA及其对甲状旁腺激素(PTH)分泌的影响。方法 对6例正常甲状旁腺组织标本和11例SHPT的甲状旁腺组织标本进行了全转录组测序,结合网站的预测,初步筛选了7个有可能调控CaSR的miRNAs,通过双荧光素酶实验,选定出一个最可能调控CaSR的miRNA。采用qRT-PCR检测正常甲状旁腺组织与SHPT甲状旁腺组织中miR-301a-5p和CaSR信使RNA表达的差异,并分析其表达量与患者血清PTH水平的相关性。采用Western blot检测SHPT甲状旁腺原代细胞转染miR-301a-5p mimics、inhibitors及各自对照之后CaSR蛋白表达的情况,同时取其上清液测定PTH的分泌情况。结果 初步选定了7个有可能调控CaSR的miRNAs,分别是:miR-15a-5p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-301a-5p和miR-503-5p。与正常甲状旁腺组织相比,miR-301a-5p在SHPT中表达上调(P<0.05),其表达量与患者PTH水平呈正相关关系,但结果无统计学意义(P>0.05);而CaSR信使RNA表达下调(P<0.05),其表达量与患者PTH水平呈负相关关系,但结果无统计学意义(P>0.05)。在细胞实验中,当miR-301a-5p过表达时,SHPT甲状旁腺原代细胞中CaSR蛋白的表达较对照组减少(P<0.05);反之,当miR-301a-5p的表达被抑制时,CaSR蛋白的表达较对照组增加(P<0.05)。过表达miR-301a-5p后,PTH的分泌与对照组的差异无统计学意义(P>0.05),而拮抗miR-301a-5p的表达后,PTH的分泌较对照组增加(P<0.05)。结论 miR-301a-5p可能通过调控SHPT中CaSR的表达而影响PTH的分泌。