南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (7): 1155-1163.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.07.12
申刘青,张顶彧,高社干
SHEN Liuqing, ZHANG Dingyu, GAO Shegan
摘要: 目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)感染对食管鳞癌细胞(ESCC)内IFNGR1棕榈酰化位点突变的机制及临床意义。方法 Western blot检测Pg感染不同时间(24、48 h)ESCC细胞KYSE30及KYSE70中IFNGR1蛋白量表达水平。2-BP检测IFNGR1的棕榈酰化作用。构建IFNGR1-WT和IFNGR1-C122A棕榈酰化位点突变位点质粒,建立IFNGR1-WT和IFNGR1-C122A稳定细胞系,分别用Pg感染IFNGR1-WT和IFNGR1-C122A细胞,并分为4组:IFNGR1-WT、IFNGR1-C122A、IFNGR1-WT+Pg和IFNGR1-C122A+Pg组。免疫荧光和click-it实验检测IFNGR1在122位点发生棕榈酰化,以及Pg促进IFNGR1在ESCC内发生棕榈酰化。利用平板克隆、划痕实验及Transwell法检测Pg感染前后,IFNGR1-WT和IFNGR1-C122A稳转细胞株的体外增殖、迁移与侵袭能力差异。免疫荧光实验检测IFNGR1与溶酶体标记物LAMP2共定位情况。免疫组化检测50例ESCC组织中Pg感染与IFNGR1蛋白的表达情况;采用卡方检验及 R Studio软件分析二者与ESCC患者临床病理特征及生存预后之间的相关性。结果 Pg感染ESCC下调IFNGR1的蛋白表达。IFNGR1在122位点发生棕榈酰化。Pg促进IFNGR1在ESCC内棕榈酰化。与 IFNGR1-WT组相比,IFNGR1-WT+Pg组体外增殖253±6.245 vs 52±2.45、迁移(0.7816±0.0071)% vs(0.4347±0.0366)%及侵袭709.33±14.57 vs 356.3±17.39能力均显著增强(P<0.05);与 IFNGR1-C122A组相比,IFNGR1-C122A+Pg组细胞体外增殖137.33±4.726 vs 29.67±3.055、迁移(0.7477±0.0057)% vs(0.2406±0.0028)%及侵袭587.33±5.033 vs 67.33±2.517能力同样均显著增强(P<0.05)。与 IFNGR1-WT+Pg 组相比,IFNGR1-C122A+Pg 体外增殖 137.33±4.726 vs 253±6.245、迁移(0.7477±0.0057)% vs(0.7816±0.0071)%及侵袭587.33±5.033 vs 709.33±14.57能力均显著降低(P<0.05)。Pg及ZDHHC3促进IFNGR1在溶酶体内降解;IFNGR1与Pg表达呈负性相关,且IFNGR1的表达降低与更差的病理特征及生存预后相关。结论 Pg感染ESCC下调IFNGR1蛋白表达量,同时诱导IFNGR1棕榈酰化,促进ESCC恶性化进展;IFNGR1的棕榈酰化位点突变减少ESCC增殖、迁移和侵袭作用;Pg感染ESCC靶向IFNGR1到溶酶体内降解可能是由于棕榈酰化作用,因此,清除Pg或抑制棕榈酰化作用能有效抑制食管癌的恶性进展。