南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (7): 1116-1126.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.07.08
范艺凡,冯志伟,范阔海,尹 伟,孙 娜,孙盼盼,孙耀贵,李宏全
FAN Yifan, FENG Zhiwei, FAN Kuohai, YIN wei, SUN Na, SUN Panpan, SUN Yaogui, LI Hongquan
摘要: 目的 应用生物信息学方法探究猪重组NK-lysin(prNK-lysin)抑制肝癌细胞转移潜在的作用靶点和通路。方法 将肝癌细胞设置为空白对照组,PBS处理组和prNK-lysin处理组,37 ℃作用6 h后,应用高效液相色谱串联质谱对肽段进行鉴定,按照Foldchange=1.2倍且P<0.05筛选出差异表达蛋白。基于GO、KEGG等数据库对差异表达蛋白进行GO功能分析和KEGG通路分析。运用RT-qPCR验证细胞中多肽-N-乙酰半乳糖胺基转移酶13(GALNT13)、跨膜蛋白51(TMEM51)和FKBP脯酰异构酶 3(FKBP3)的 mRNA 相对表达量。Western blot 验证 FKBP3 的蛋白表达量。结果 蛋白组学表明,与空白对照组相比,prNK-lysin处理组中有1989个差异表达蛋白;与PBS处理组相比,prNK-lysin处理组中有2753个差异表达蛋白;PBS处理组和空白对照组相比,有15个差异表达蛋白。相对于PBS处理组和空白对照组,prNK-lysin处理组中共有1909个差异表达蛋白。GO和KEGG分析表明差异表达蛋白主要参与Viral process、translational initiation、RNA binding等过程,主要富集于Ribosome、Protein process in endoplasmic reticulum、RNA transport等通路。RT-qPCR表明,与空白对照组相比,prNK-lysin处理组显著升高了细胞内GALNT13(1.54±0.06 vs 1.02±0.17, P<0.05)和TMEM51(1.27±0.07 vs 1.00±0.04, P<0.01)的mRNA相对表达量,显著降低了FKBP3(0.43±0.06 vs 1.02±0.24, P<0.05)的mRNA相对表达量。Western blotting表明prNK-lysin处理组与空白对照组相比显著降低了细胞内 FKBP3(0.68±0.02 vs 1.02±0.03, P<0.001)的蛋白表达量。结论 prNK-lysin 处理后肝癌细胞SMMOL/LC-7721的蛋白质组与空白组相比发生显著变化,prNK-lysin作用于FKBP3蛋白,并能通过影响细胞内氧化磷酸化和糖酵解等通路发挥其抑制作用。