南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (4): 552-559.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.04.07
宗世烨,周 静,蔡伟伟,余 芸,王 颖,宋宜宁,程静文,李宇会,高 艺,吴百海,咸 郝,魏 芳
ZONG Shiye, ZHOU Jing, CAI Weiwei, YU Yun, WANG Ying, SONG Yining, CHENG Jingwen, LI Yuhui, GAO Yi, WU Baihai, XIAN Hao, WEI Fang
摘要: 目的 探究小檗碱(BBR)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡/自噬失衡的调控作用及机制。方法 CCK-8法检测BBR对RA-FLSs的增殖抑制作用,实验设空白对照组、TNF-α(25 ng/mL)组、TNF-α+BBR(10、20、30、40、50、60、70、80 μmol/L)组,Annexin V/PI双染流式法和JC-1免疫荧光染色检测BBR对RA-FLSs凋亡的影响,Western blot检测BBR对RA-FLSs自噬和凋亡相关蛋白表达水平的影响。进一步增加自噬诱导剂RAPA和自噬抑制剂氯喹(CQ)作为对照,激光共聚焦检测mCherry-EGFP-LC3B观察自噬流变化;并设置活性氧(ROS)模拟物H2O2和ROS抑制剂NAC观察BBR对ROS、mTOR、p-mTOR水平的影响。结果 CCK-8结果显示BBR可呈时间和浓度依赖性抑制RA-FLSs增殖活力,流式和JC-1染色结果显示BBR(30 μmol/L)可显著增加 RA-FLSs 凋亡率(P<0.01),降低线粒体膜电位(P<0.05)。Western blot结果显示BBR处理后Bcl-2/Bax(P<0.05)和LC3B-Ⅱ/Ⅰ(P<0.01)的比值降低,p62 蛋白表达升高(P<0.05)。mCherry-EGFP-LC3B自噬流检测结果也显示,BBR可阻断自噬流。免疫荧光结果证实BBR显著降低TNF-α诱导后ROS水平,上调自噬调控蛋白p-mTOR表达水平(P<0.01),且受ROS水平调控,合用RAPA可显著降低BBR对RA-FLSs的促凋亡作用(P<0.01)。结论 BBR可能是通过调控ROS-mTOR抑制RA-FLSs自噬,促进其凋亡。