南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (3): 340-348.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.03.02
马振南,赵雪峰,张晓微,许广大,刘福全
MA Zhennan, ZHAO Xuefeng, ZHANG Xiaowei, XU Guangda, LIU Fuquan
摘要: 目的 探讨DTX2对结直肠癌(CRC)细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法 利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组(DTX2-shRNA)、敲低空载组(neg-shRNA)、未转染组(con)、过表达空载组(pcDNA)及过表达组(pcDNA-DTX2),利用qRT-PCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA ,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果 CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低(P<0.01),过表达组中明显升高(P<0.01)。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Western blotting检测提示,Notch2、NICD、p-Akt及MMP-2蛋白平均表达水平,与con和neg-shRNA相比,DTX2 shRNA明显降低(P<0.05);与con和pcDNA相比,pcDNA-DTX2明显升高(P<0.05),而这些蛋白在con、neg-shRNA及pcDNA间的平均表达水平无明显差异(P>0.05)。回复实验提示,siRNA-Notch2 可扭转pcDNA-DTX2增强的CRC细胞迁移侵袭的能力(P<0.01),相应蛋白水平的变化也具有统计学意义。结论 DTX2通过Notch2/Akt轴促进CRC细胞迁移侵袭的能力,DTX2可能成为CRC的新型生物学指标。