南方医科大学学报 ›› 2022, Vol. 42 ›› Issue (9): 1418-1425.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2022.09.20
江文豪,钱垂文
JIANG Wenhao, QIAN Chuiwen
摘要: 目的 评价新型温敏性重组人釉原蛋白(rhAm)载体和传统丙二醇藻酸酯(PGA)载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法 分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm,2%的壳聚糖(CS)和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液(βGP)作为交联剂制备CS-βGP-rhAm凝胶;表征通过检测黏度、凝固时间、pH值、溶胀率、体外生物降解率和缓释性能来评估;通过观察金黄色葡萄球菌生长状况比较材料的抗菌效果;生物相容性评估是在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)上利用CCK8检测各组细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测成骨基因mRNA表达,Western blot检测蛋白的表达水平,碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化情况。结果 PGA-rhAm具有黏度值3.262±0.055 Pa.s,CS-βGP-rhAm在37 ℃下具有6 min凝固成型能力、接近口腔环境的pH值、约90%的溶胀率,同时缓释rhAm可维持2周以上,自身降解时间维持3周以上。CS-βGP负载rhAm相比PGA负载rhAm更有效抑制金黄色葡萄球菌生长(P<0.001)。细胞水平上,CS-βGP是否负载rhAm都可促进细胞增殖(P<0.001),PGA促进细胞增殖效果不显著。划痕实验显示,CS-βGP和PGA负载rhAm后均可促进细胞迁移(P<0.01)。RT-qPCR和Western blot结果显示,CS-βGP负载rhAm能促进RUNX2、OCN mRNA水平(P<0.001),上调Ki67(P<0.001)、RUNX2(P<0.001)、Collagen Ⅰ(P<0.01)、β-catenin(P<0.05)蛋白表达。PGA负载rhAm促进RUNX2(P<0.05)、OCN(P<0.01)mRNA水平表达,蛋白水平变化无统计学意义。CS-βGP组ALP染色蓝紫色颗粒数增加,PGA组无明显变化。结论 CS-βGP具有能缓释rhAm的性能,同时相比传统的PGA载体,CS-βGP具有温度成型的特点、抑制金黄色葡萄球菌生长的性能、显著提高hPDLFs的生物活性并且负载rhAm后不影响其生物活性。