南方医科大学学报 ›› 2021, Vol. 41 ›› Issue (7): 972-979.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2021.07.02
黄河灵，高玉元，聂 坤，王丽娟
摘要： 目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制，进而对神经元的影响。方法 慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细 胞，敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞，Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型，向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估，组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况，Western blot 检测小鼠黑质 MIF、NLRP3及TH表达情况。结果 感染病毒的细胞MIF mRNA（P<0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示，0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较，MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042） 和caspase-1（P=0.003）表达减少，细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P<0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较，MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016），浆蛋白p65表达升高（P<0.001）。相较于MPP+的条件培养基，MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP 组比较，注射 MIF-shRNA 的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低，悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示，相较于MPTP组，AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004），小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045），TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论 抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放，减轻小胶质细胞激活，减轻炎症反应，改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤，在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。
