脂联素（adiponectin, ANP）是由脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白。ANP受体广泛表达于中枢神经系统和周围组织中，其中在海马区表达最多，ANP可通过与ANP受体结合，激活中枢神经系统的信号通路，从而参与大脑功能的调控^[1]。近年来，越来越多的研究证实脂联素在阿尔茨海默病（AD）的发病中扮演着重要角色。目前国外对脂联素与AD关系的研究尚未统一，国内相关研究极少。本研究通过对AD患者和健康对照组血浆APN水平进行检测和认知功能的评估，从而探讨AD患者血清脂联素水平及其与认知功能改变的相关性，为AD的早期诊疗、病情评估提供理论依据。

AD组为2012年8月~2016年8月在长沙市第一医院神经医学中心、中南大学湘雅三医院神经内科临床诊断很可能的AD患者，AD组的入选标准：

（1）发病年龄≥65岁，无痴呆家族遗传史；（2）所有患者均进行临床检查、简易精神状态量表（MMSE）筛查，MMSE得分低于临界值（文盲≤17分、小学文化程度≤20分、初中及以上文化程度≤24分）；（3）患者无抑郁，汉密尔顿抑郁量表 < 7分（17项版本）；（4）患者Hachinski缺血指数量表≤4分；（5）经过至少1名神经科医生诊断，符合美国国立神经病学、语言障碍和卒中-老年痴呆和相关疾病学会工作组（NINCDS-ADRAD）的“很可能AD”的诊断标准。AD组的排除标准（1）有痴呆家族遗传史的患者；（2）非“很可能AD”的患者；（3）有抑郁症状的患者（汉密尔顿抑郁量表评分>17分）；（4）Hachinski缺血指数量表>4分的患者；（5）有心梗、心衰、2型糖尿病、脑卒中、自身免疫性疾病的患者。对照组分别来自于同期两家医院健康管理中心的非痴呆体检人群。收集上述两组人群的临床资料和外周血标本。AD组共90例，对照组共90例。

抽取研究对象的清晨空腹抽静脉血约5 mL，选择EDTA作为抗凝剂，静置2 h后离心20 min（2000 r/min）。仔细收集上层血浆，-80 ℃冰箱保存。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血浆APN水平。血浆脂联素试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。检测板板内与板间变异系数均小于10%，所有标本均设有复孔，按照说明书步骤严格进行实验，测定吸光度，然后再根据标准曲线计算脂联素水平。

所有患者均行MMSE评估，并根据MMSE评分将AD组分为轻度（大于或等于21分）12人；中度（10~20分）30人；重度（小于10分）48人。

运用SPSS19.0统计软件包、GraphPad Prism 5软件包进行统计分析及绘图。两组人群间的一般特征比较采用t检验或χ²检验，多个样本均数的比较运用GraphPad Prism 5软件采用单因素方差分析，多个样本均值间两两比较采用方差分析中Newman-Keuls Multiple Comparison Test法，两变量之间关系采用线性相关分析，定义P < 0.05认为差异具有统计学意义。

AD组与对照组在性别、年龄、丧偶、体质量指数、头部创伤史、高血压病史、甘油三酯、胆固醇、同型半胱氨酸、高密度脂蛋白、空腹血糖、吸烟史等方面比较无统计学差异（P>0.05）。AD组与对照组在文化程度、低密度脂蛋白值比较差异有统计学意义（P < 0.05），说明文化程度低、低密度脂蛋白高可能是AD的危险因素（表 1）。AD组血清脂联素水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。图 1A散点图和图 1B箱图分别说明AD组和对照组脂联素的分布情况及两组间脂联素水平的比较。

表 1(Table 1)

表 1 AD组与对照组的一般资料比较 Table 1 Clinical characteristics in AD group and control group Index AD group (n=90) Control group (n=90) χ or F P Gender (Male/Female) 38/52 36/54 0.092 0.76 Age (year) 74.97±6.13 74.34±5.94 0.078 0.50 Education (≤primary school/ > primary school) 55/35 41/49 4.375 0.036* Widowed (yes/ no) 32/58 28/62 0.400 0.53 Head trauma (yes/no) 6/84 4/86 0.424 0.52 Hypertension (yes/no) 25/65 22/68 0.259 0.61 BMI (kg/m2) 22.06±1.86 22.60±1.56 2.234 0.07 TC (mmol/L) 5.24±0.85 5.16±0.57 11.275 0.48 TG (mmol/L) 1.79±1.11 1.92±1.31 1.507 0.47 LDL-C (mmol/L) 2.93±1.04 2.54±1.14 0.008 0.02* HDL-C (mmol/L) 1.36±0.43 1.31±0.51 0.636 0.53 FBG (mmol/L) 5.47±0.93 5.26±0.69 7.883 0.08 Smoke (yes/no) 30/60 25/65 0.655 0.42 Homocysteine (umol/L) 13.28±6.32 12.61±5.93 0.275 0.47 ANP (pg/mL) 6.56±3.16 12.53±2.87 0.076 0.001* BMI: Body mass index; TC: Totalcholesterol; TG: Triglyceride; LDL: Low Density Lipoprotein; HDL: High Density Lipoprotein; GLU: Glueose; ANP: Adiponectin. *P < 0.05 compared with the control group.

表 1 AD组与对照组的一般资料比较 Table 1 Clinical characteristics in AD group and control group

图 1(Figure 1)

图 1 AD组与对照组的血清ANP的离散分布与水平比较 Figure 1 Discrete distribution of serum ANP in AD group and control group (A) and comparison of serum ANP levels between the two groups (B).

运用GraphPad Prism 5软件采用单因素方差分析，多个样本均值间两两比较采用方差分析中Newman-Keuls Multiple Comparison Test法分析比较AD组各亚组间及与对照组血清ANP的水平。AD亚组间血清ANP水平比较及各亚组与对照组的血清ANP水平比较见表 2和图 2。重度组与对照组比较：Mean Diff=-8.210，q=28.06，P < 0.001；重度组与轻度组比较：Mean Diff=-7.948，q=15.04，P < 0.001；重度组与中度组比较：Mean Diff=-3.533，q=9.272，P < 0.001；中度组与对照组：Mean Diff=-4.677，q=13.55，P < 0.001；中度组与轻度组：Mean Diff=-4.415，q=7.895，P < 0.001；轻度组与对照组：Mean Diff=-0.2617，q=0.5201，P>0.05；AD各亚组与对照组比较：F=142.2，P < 0.001。

表 2(Table 2)

表 2 AD各亚组与对照组的血清ANP水平相互比较 Table 2 Serum ANP in AD subgroups and control group AD group (n=90) Mild AD (n=12) Moderate AD (n=30) Severe AD (n=48) Control group (n=90) ANP (μg/mL) 12.28±2.45 7.86±1.20 4.33±1.46 12.54±2.87 F 142.2 P 0.000 *P < 0.05 compared with the control group.

表 2 AD各亚组与对照组的血清ANP水平相互比较 Table 2 Serum ANP in AD subgroups and control group

图 2(Figure 2)

图 2 AD各亚组及对照组之间的血清ANP水平相互比较 Figure 2 Comparison of the serum ANP in AD sub-groups and control group.

AD患者血清ANP水平与MMSE评分相关分析见图 3。直线相关分析结果显示：AD患者血清ANP水平与MMSE评分呈正相关性（r=0.683，P < 0.001）。

图 3(Figure 3)

图 3 AD患者血清ANP水平与MMSE评分的直线相关分析 Figure 3 Linear correlation analysis of ANP level and MMSE score of the AD patients.

ANP是脂肪组织分泌最为丰富的蛋白之一，近年来大量研究发现：较高的循环ANP水平对AD具有保护作用。Masaaki等^[2]研究发现AD和MCI患者脑脊液的脂联素水平较正常对照组明显降低，且这种降低与颅内tau蛋白的过度磷酸化水平一致。Kamogawa等^[3]通过对517名中老年社区居民的研究发现：在校正了腹部皮下脂肪含量、年龄等混杂因素干扰后，体内含高脂联素水平的MCI患者比低脂联素水平的MCI患者发展为AD的速度要慢，说明ANP是延缓AD进展的保护性因素。本课题组前期研究发现：脂联素基因rs266729、rs1501299基因多态性可能与湖南地区汉族人群迟发型阿尔茨海默病发病有关^[4]。然而由Dukic^[5]等和Kitagawa ^[6]等分别开展的两项研究却发现：血清脂联素水平可能与AD关系并不密切。本研究结果显示：AD组血清ANP水平较对照组显著降低，差异有统计学意义，我们的研究结果与以往的研究报道一致^{[3, 7-11]}。Teixeira等^[8]发现MCI、AD患者循环ANP水平较正常对照组普遍降低，认为低血清ANP水平参与了AD的认知功能紊乱的病理改变过程。Kálmán等^[9]研究脂肪因子、胆碱酯酶抑制剂与AD关系时发现：服用多奈哌齐的AD患者其血清ANP显著升高，并伴认知功能改善，进一步说明了升高血清ANP对AD患者具有保护作用。2型糖尿病患者循环血清ANP越低，其颞区灰质的体积越小，同时颞区灰质葡萄糖代谢也会降低，并且在校正年龄、性别、教育、APOEε4基因等干扰因素后，这一结论仍然成立^[7]。回顾相关文献我们发现ANP对AD保护作用的机制包括：减少Aβ的堆积和产生^[12]，抵抗由Aβ引发的中枢病理及毒性作用^[13]，改善中枢神经胰岛素抵抗^[10]，保护中枢神经细胞^[14]，改善血脑屏障功能^[15]，调节中枢免疫炎症反应^[16-17]，保护血管内皮细胞、对抗血管动脉粥样硬化、调节糖脂代谢等^[18-20]。我们的研究与Dukic等^[5]和Kitagawa ^[6]分别开展的两项研究发现不一致：Dukic对比了70例AD患者与50例认知功能正常的健康人群血清脂联素水平，然而并未发现两者脂联素分布存在统计学上的差异。Kitagawa ^[6]研究了466名存在明显血管危险因素的患者，在平均随访6.9年，他们发现拥有较高或较低血清脂联素的患者发展至AD的风险并无明显差异。由此认为血清脂联素与AD的发生发展无明显关系。我们认为样本量和人种不同是我们与Dukic研究不一致可能原因；而Kitagawa研究纳入的人群是存在明显血管危险因素的患者，这可能是导致我们研究结论不一致的主要原因。

根据MMSE评分，我们首次将AD组分成3个不同亚组进行研究，进一步探讨脂联素水平在不同亚组间的分布情况，结果发现：不同亚组AD患者血清ANP水平有差异，与对照组比较：中、重度AD患者血清ANP下降明显，而轻度AD患者血清ANP和对照组无差异，这提示轻度AD患者早期ANP代谢异常可能并不明显。对AD患者血清ANP水平和MMSE评分进行相关分析发现：AD患者MMSE评分越低（认知功能障碍越严重），其血清ANP水平越低，说明血清ANP水平与MMSE评分呈正相关性。可以推测，AD患者血清ANP降低的程度可以间接反映AD患者认知功能障碍的严重程度；ANP也可能是较好的AD血清学标记物和治疗的靶点；ANP血清浓度的检测可能对病情和治疗转归的评估具有重要的价值。但实验结果可能受检测样本量、样本人群身体基础疾病等因素的影响，有待于进一步规范研究方案如扩大样本量、剔除其他混杂因素等，使结果更可信。