消化系统肿瘤包括上消化道肿瘤和下消化道肿瘤，如食管癌、胃癌、大肠癌（直肠癌、结肠癌）及原发性肝癌等^[1]，此发病与多种因素有关。当前研究比较多的是CCND1基因，CCND1基因位于11q13染色体，包括5个外显4个内含子，长约15 kb，编码细胞周期蛋白D1^[2]。在CCND1基因的第4号外显子最后一个碱基上存在6870A多态性，这个位点的基因型的变化与多种肿瘤疾病有关，如肝癌、乳腺癌、肺癌、口腔癌、宫颈癌等与CCND1基因G870A多态性的研究也比较多，但是关于CCND1基因G870A多态性与消化系统肿瘤的研究比较少，有研究认为CCND1基因G870A多态性与消化系统肿瘤发生有关，但是不同的消化道肿瘤的结果存在一定的差异。本研究针对这些特点，将消化系统肿瘤中的食管癌、胃癌、直肠癌、结肠癌的发病与CCND1 基因G870A多态性的相关性进行研究，确定每种消化道肿瘤的发病与CCND1基因G870A多态性的关系。

我院于2010年8月~2014年8月的164例消化系统肿瘤患者作为病例组（分为胃癌组、结直肠癌组各82例），选取同期健康体检的82例健康人群作为对照组。所有患者均经过病理切片证实为胃癌、结直肠癌，并签知情同意书。排除严重的脑、肝、肾功能损害及血液系统等疾病。3组研究对象在性别、年龄等方面没有明显差异（P>0.05，表 1），具有可比性。

表 1(Table 1)

表 1 3组研究对象的基本资料比较 Table 1 Comparison of demographic data among the 3 groups (n=82) Project Gastric cancer group Colorectal cancer group Control group P Gender Male 59（72.0） 58（70.7） 60（73.2） ＞0.05 Female 23（28.0） 24（29.3） 22（26.8） ＞0.05 Age (years old) 57.9±15.2 58.2±14.2 57.2±15.2 ＞0.05

表 1 3组研究对象的基本资料比较 Table 1 Comparison of demographic data among the 3 groups (n=82)

主要试剂：TaqDNA聚合酶试剂、dNTPs、蛋白酶K、电泳琼脂糖、DNA marker、饱和酚。

主要仪器设备：PCR扩增仪、紫外分光光度计、电泳仪、凝胶成像分析系统。采集对照组及病例组患者的EDTA-Na2 抗凝血2 mL，用常规酚氯仿法提取外周血基因组DNA并测定DNA的浓度和纯度，低温保存。

CCND1基因G870A 多态基因型的引物，上游引物-5，5'-AGTTCATTTCCAATCCGCCC-3'，下游引物-3，5'-TTCCGTGGCACTAGGTGTC-3'。PCR反应体系^[5]：加入10倍Buffer 2.0 μLMgCl₂ 及2.0 μL dNTP，0.4 μL上下游引物，0.4 μL TaqDNA聚合酶，0. 25 μL DNA模板以及2 μL双蒸水补足至总溶液体积为20 μL。PCR反应条件^[6]：95 ℃预变性5 min ，95 ℃变性反应45 s，52 ℃条件下退火45 s，72 ℃延伸反应1.5 min，重复35 个循环，72 ℃延伸反应15 min，然后进行PCR扩增，扩增后采用1.5%琼脂糖电泳检测扩增产物。PCR产物用限制性内切酶DNA marker 在37 ℃水浴条件消化反应16 h后，酶切产物经1.5%琼脂糖凝胶进行电泳检测，即得到DBCCR1多态基因型的基因分型。

数据分析使用SPSS19.0 统计学软件，数据符合正态分布，用基因计数法计算病例组和对照组的基因型和等位基因的分布频率，等位基因频率=（2×纯合子数+杂合子数）/（2×受检人群）。计数数据用例数和%表示，计数数据进行χ²检验，P<0.05 表示差异，有统计学意义。

胃癌组、结直肠癌组的CCND1基因G870A位点中的GG、GA和AA的分布频率与对照组存在明显差异（P<0.05，表 2）。

表 2(Table 2)

表 2 3组研究对象的CCND1基因G870A基因型分布频率的比较 Table 2 Comparison of the frequency of G870Agenotype of the CCND1 gene in the 3 groups (n,%) Group GG GA AA GA+AA Case group (n=164) Gastric cancer group (n=82) 16（19.5） 46（56.1） 20（24.4） 66（80.5） Colorectal cancer group (n=82) 14（17.1） 50（61.0） 18（22.0） 68（82.9） Control group (n=82) - 40（48.8） 30（36.6） 12（14.6） 42（51.2） χ2 value - 4.248 5.246 4.098 5.956 P - ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表 2 3组研究对象的CCND1基因G870A基因型分布频率的比较 Table 2 Comparison of the frequency of G870Agenotype of the CCND1 gene in the 3 groups (n,%)

由表 3，4可知GA和AA基因型发生消化系统肿瘤发病危险明显高于GG基因型，具有统计学意义（P<0.05）；而且高分化和高分期患者的基因型分布率高于低分化和低分期的患者，具有统计学意义（P<0.05）。

表 3(Table 3)

表 3 胃癌的分级和分期与CCND1基因G870A基因型分布比较 Table 3 Comparison of the classification and staging of gastric cancer with G870Agene CCND1 genotype distribution (n,%) Gastric cancer grading GG GA AA GA+AA Degree of differentiation Advanced differentiation（n=30） 4（13.3） 19（63.3） 7（23.3） 26（86.7） Lower differentiation（n=52） 18（23.4） 19（37.5） 15（39.1） 34（65.4） χ2 - 4.249 5.279 4.987 6.047 P - 0.035 0.029 0.036 0.021 TNM staging I-II（n=52） 21（40.4） 15（28.8） 16（30.8） 31（59.6） III-IV（n=30） 6（20.0） 20（66.7） 4（13.3） 24（80.0） χ2 - 5.054 5.876 5.665 6.495 P - 0.026 0.019 0.022 0.018

表 3 胃癌的分级和分期与CCND1基因G870A基因型分布比较 Table 3 Comparison of the classification and staging of gastric cancer with G870Agene CCND1 genotype distribution (n,%)

表 4(Table 4)

表 4 结直肠癌的分级和分期与CCND1基因G870A基因型分布比较 Table 4 Classification and staging of colorectal cancer and the distribution of G870Agene CCND1 genotype (,%) Grading of colorectal cancer GG GA AA GA+AA Degree of differentiation Advanced differentiation（n=31） 5（16.1） 15（48.4） 11（35.5） 26（83.9） Lower differentiation（n=51） 13（25.5） 15（29.4） 23（45.1） 38（74.5） χ2 - 4.249 5.279 4.087 5.947 P - 0.025 0.039 0.046 0.021 TNM staging I-II（n=51） 25（49.0） 15（29.4） 11（21.6） 26（51.0） III-IV（n=31） 6（19.3） 21（67.7） 4（12.9） 25（80.6） χ2 - 5.889 5.576 4.365 6.295 P - 0.025 0.029 0.036 0.015

表 4 结直肠癌的分级和分期与CCND1基因G870A基因型分布比较 Table 4 Classification and staging of colorectal cancer and the distribution of G870Agene CCND1 genotype (,%)

由表 5可知CCND1基因G870A位点多态性与消化系统肿瘤发病的危险升高具有良好的相关性（P<0.05）。

表 5(Table 5)

表 5 CCND1基因G870A多态性与胃癌发病危险的相关性分析 Table 5 Correlation Analysis between CCND1 gene G870Apolymorphism and risk of gastric cancer Gastric cancer grading GG GA AA P GA+AA P Degree of differentiation Advanced differentiation（n=30） 4（13.3） 19（63.3） 7（23.3） 0.025 26（86.7） 0.021 Lower differentiation（n=52） 18（23.4） 19（37.5） 15（39.1） 34（65.4） TNM staging I-II（n=52） 21（40.4） 15（28.8） 16（30.8） 0.031 31（59.6） 0.018 III-IV（n=30） 6（20.0） 20（66.7） 4（13.3） 24（80.0）

表 5 CCND1基因G870A多态性与胃癌发病危险的相关性分析 Table 5 Correlation Analysis between CCND1 gene G870Apolymorphism and risk of gastric cancer

肿瘤被认为是一类细胞周期性疾病，其细胞生长周期的失调是肿瘤的发生发展过程中起关键作用^[7]。细胞周期蛋白D1 在正常细胞周期的调控中起到重要作用，编码细胞周期蛋白D1 的基因即CCND1 基因的G870A基因与多种肿瘤的发生具有一定的相关性^[8]。CCND1基因的G870A多态性与宫颈癌、口腔癌等疾病的相关性的研究比较，研究发现其发病与CCND1基因的G870A多态性的基因分布有密切关系。有研究^[9]发现CCND1基因的G870A多态性与消化系统肿瘤有关，而且上消化道肿瘤和下消化道肿瘤与CCND1基因的G870A多态性的关系存在一定的差异。

下消化道系统肿瘤主要是结肠癌和直肠癌，而且容易2 种肿瘤同时发生，出现结肠癌，对CCND1 基因的G870A多态性与结肠癌的发病的相关性的研究也比较多。有研究^[10-12]报道直肠癌的发病风险增加与CCND1基因的G870A多态性，而且男性患者的A等位基因增加结直肠癌发病风险的作用，含A等位基因的患者发生结肠癌的几率就会增加。也有研究^[13]报道结直肠癌家族史的AA和AG基因型人群发生结直肠癌的危险性增加，而GG提高转移的发生。而其他的研究显示无此研究结果。本研究的结果和此研究的结果基本一致，但是没有对性别进行分析，只是对CCND1基因的G870A多态性与结肠癌患者的发病的危险性进行分析，分析也发现含有A等位基因的患者发生结肠癌的几率就会增加。

上消化道肿瘤主要是食管癌和胃癌等，对CCND1基因的G870A多态性与上消化道肿瘤的研究显示上消化道肿瘤的发病与CCND1基因的G870A多态性有密切关系。有研究^[14]报道胃癌癌前病变的研究显示AA基因型能够明显提高肠上皮化生的危险，含A等位基因的患者发生肿瘤的危险性比较大。本研究通过研究也显示CCND1基因的G870A的A等位基因或AA基因型发生胃癌的几率明显高于GG基因型，而且更容易患病。

本研究针对当前研究的特点将消化系统肿瘤中比较常见的肿瘤胃癌和结肠癌与CCND1基因G870A多态性的相关性进行分析，从而确定CCND1基因G870A多态性与消化系统肿瘤发病危险性的关系。通过研究发现胃癌和结肠癌的CCND1基因G870A的AA、AG、GG基因型的分布频率与健康人群存在明显差异，而且对肿瘤的分化程度及分期的CCND1 基因G870A的AA、AG、GG基因型的分布频率的关系，结果发现分化程度越严重及分期越高，AA+AG的分布频率就会越高，而且对CCND1基因G870A多态性与消化系统肿瘤的相关性分析显示含有A基因型更容易发生发病。

综上所述，CCND1基因G870A多态性与消化系统肿瘤发病危险有关，而且含有A基因型更容易发生消化系统肿瘤，与消化系统肿瘤分化和分期相关。