α-地中海贫血（简称“地贫”）是我国南方地区高发遗传病，其中广西和广东的人群携带率分别高达17.6%和8.5%^[1-2]，重型或中间型为严重致死致残性疾病，通过分子筛查和遗传咨询，对高风险胎儿进行产前基因诊断而防止重型患儿的出生，是当前国际上公认的首选措施。α-地贫是源于α珠蛋白基因缺失或点突变而导致的α珠蛋白链合成减少或缺乏，中国南方最常见的α-地贫基因主要为--^SEA、-α^3.7和-α^4.2缺失，以及QS、CS和WS点突变。此外仍有少数罕见或未知突变不在常规检测的范围之内，在遵循表型与基因型相结合的地贫基因诊断基本原则基础上，为避免漏检，须作进一步分析以明确突变的类型及性质。本研究即报道了一种中国人群中罕见α-地贫基因^*92A＞G突变复合SEA缺失血红蛋白H（HbH）病的基因诊断及家系分析。

先证者，男，出生3个月，广西钦州市人，因肺部感染来钦州市妇幼保健院儿科重症病区住院治疗，经血常规检测发现平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）明显降低并有中度贫血，血红蛋白分析检出血红蛋白H（HbH）且含量较高，而常规地贫基因检测基因型为--^SEA/αα，疑存在其他地贫基因突变。在所有受试对象或监护人均知情同意的情况下，采集先证者及其父母、姐姐、哥哥的外周静脉全血，EDTA-K2抗凝，进行地贫基因检测及家系分析（家系成员见图 1F）。

图 1(Figure 1)

图 1 血红蛋白组份高效液相色谱分析图 Figure 1 HPLC analysis of the hemoglobin components in the proband and his family members. A: Father of the proband (Ⅰ1);B: Mother (Ⅰ2); C: Brother (Ⅱ1); D: Sister (Ⅱ2); E: The proband (Ⅱ3); F: Pedigree analysis.

先证者及家系成员EDTA-K₂抗凝外周静脉全血，用迈瑞BC-5380全自动五分类血液细胞分析仪（深圳迈瑞公司），按仪器操作说明书检测血红蛋白量（HGB）、MCV、MCH等红细胞参数。用Bio-Rad VARIANT^TMⅡ血红蛋白分析系统（美国Bio-Rad公司）及配套试剂，按操作说明进行血红蛋白组份分析。

先证者及家系成员EDTA-K2 抗凝外周静脉全血采用经典酚-氯仿法提取基因组DNA（gDNA）。用缺失型α-地中海贫血基因诊断试剂盒（gap-PCR法，深圳亚能生物公司）检测α-地贫基因--^SEA、-α^3.7和-α^4.2等３种常见缺失类型；用非缺失型α-地中海贫血基因诊断试剂盒（RDB法，深圳亚能生物公司）检测α-地贫基因QS、CS和WS等三种常见点突变类型；用β-地中海贫血基因诊断试剂盒（RDB法，深圳益生堂公司）检测17种常见β-珠蛋白基因点突变；用gap-PCR法检测α-地贫基因--^THAI缺失^[3]。

根据参考文献^[3]，以PCR法分别扩增α2及α1珠蛋白基因全长序列（α2：1085 bp，α1：1181 bp），以Sanger双脱氧链终止法，用BigDye Terminator v3.1测序试剂盒（美国ABI公司），按操作说明，于ABI 3500DX遗传分析仪（美国ABI公司），对先证者及其家系成员进行α-珠蛋白基因序列测定。测序结果于http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/进行序列比对，分析查找突变位点。

该家系5个成员红细胞指标及血红蛋白分析结果见表 1及图 1A~E，先证者（Ⅱ₃）及其母亲（Ⅰ₂）、姐姐（Ⅱ₂）和哥哥（Ⅱ₁）均为典型MCV、MCH和HGB 降低的小细胞低色素贫血表型，先证者父亲（Ⅰ₁）血液学表型正常；先证者（Ⅱ₃）、先证者母亲（Ⅰ₂）和先证者姐姐Ⅱ₂）的血红蛋白分析均显示为HbA2%降低（＜2.3%），且检出异常血红蛋白H（HbH），为HbH病表型特征。

表 1(Table 1)

表 1 先证者及家人的血液学表型和基因检测结果 Table 1 Hematological and genetic test results of the proband and his family members MemberAge Age MCV (fl) MCH (pg) HGB (g/L) HbF (%) HbA2 (%) HbH (%) Genotype Father (Ⅰ1) 39 y 86.1 29 134 0.1 2.8 αα/α*92A＞Gα Mother (Ⅰ2) 32 y 68.3 16.6 92 1.5 1.9 5.8 --SEA/-α3.7 Brother (Ⅱ1) 10 y 66.6 21.2 105 1.5 2.6 -α3.7/α*92A＞Gα Sister (Ⅱ2) 13 y 64.6 18.4 81 0.9 1.0 9.8 --SEA/α*92A＞Gα Proband (Ⅱ3) 3 m 53.1 15.7 74 11.3 18.3 --SEA/α*92A＞Gα

表 1 先证者及家人的血液学表型和基因检测结果 Table 1 Hematological and genetic test results of the proband and his family members

如表 1所列，家系成员均排除17种常见β-地贫基因点突变、3种常见α-地贫基因点突变、3种常见α-地贫基因缺失突变和--^THAI缺失突变。先证者母亲（Ⅰ₂）的表型结果显示为缺失型HbH病患者，常规地贫基因检测基因型为--^SEA/-α^3.7，基因型与表型相符。先证者哥哥（Ⅱ₁）有明显的地贫表型，而常规地贫基因检测结果为α-地贫基因-α^3.7缺失携带者，提示可能存在未检出的其它罕见或未知α-地贫基因突变。先证者（Ⅱ₃）及其姐姐（Ⅱ₂）的表型结果均显示为HbH病患者，但常规地贫基因检测结果均为α-地贫基因---^SEA缺失携带者，也提示存在未检出的其它罕见或未知α-地贫基因突变。

该家系中，先证者母亲（Ⅰ₂）无α1珠蛋白基因目的序列扩增产物，且α2珠蛋白基因序列中未检出突变，与其表型结果相符；其它成员均检出α2 珠蛋白基因${{3}^{'}}$端非编码区（${{3}^{'}}$UTR）92A＞G 突变（Poly A：AATAAA＞AATGAA，α^*92A＞G），结合2.2的检测结果，确定家系成员基因型，经分析表型与基因型结果相符（表 1，图 2）。

图 2(Figure 2)

图 2 先证者及其父亲DNA测序结果图 Figure 2 DNA sequencing for the proband and his father. The arrows indicate the position of α*92A＞Gα mutation.Upper: DNA sequencing result of th proban${{\text{d}}^{'}}$s father showing a heterozygous A/G mutation; Lower: DNA sequencing result of the proband showing a homozygous A/G combined with a --SEA mutation.

α-地中海贫血HbH病在中国南方，尤其是广西地区有较高的基因型频率^[4-6]，HbH病可分缺失型分非缺失型。非缺失型HbH病的α-地贫基因点突变多发生在功能较强的α2珠蛋白基因，α珠蛋白链的合成减少更显著，导致比缺失型HbH病更严重的临床表现和血液学改变^[3]。基于表型与基因型相结合的地贫基因诊断原则^[3]，该家系中先证者血常规检测结果显示有明显MCV和MCH降低及中度贫血,血红蛋白组份分析检测检出HbH且HbA2降低，为典型α-地贫HbH病表型特征，但常规地贫基因检测为SEA缺失杂合（--^SEA/αα）的标准型α-地贫基因型，其基因型与表型明显不相符，提示很可能存在未检出的少见或罕见α-地贫基因突变；家系成员中先证者哥哥（Ⅱ₁）和姐姐（Ⅱ₂）亦是如此（表 1）。经进一步α珠蛋白基因测序分析，这些家系成员均检出α-地贫基因α^*92A＞G突变，确认先证者及先证者姐姐的基因型为--^SEA/α^*92A＞Gα（非缺失型HbH病），先证者哥哥基因型为-α^{3. 7}/α^*92A＞Gα（标准型α-地贫）、父亲基因型为αα/α^*92A＞Gα（静止型α-地贫），此基因型结果与表型相符；也确认此为父源突变基因而遗传至姐弟三人，符合孟德尔遗传规律。表 1的数据也显示，先证者母亲（Ⅰ₂）为缺失型HbH病（基因型--^SEA/-α^3.7），其贫血程度等症状比非缺失型HbH病的儿子（Ⅱ₃）和女儿（Ⅱ²）较轻。

目前临床上的地贫基因检测，主要是采用商品化试剂盒检测本地区常见地贫基因类型，罕见或未知突变类型不在检测范围而易于造成漏检，因此地贫基因诊断是基于表型与基因型相结合的诊断原则，当受检者血液学表型与常规检测的地贫基因型不符时，可能存在罕见或未知突变，须进一步进行检测分析预以确认，本研究的结果也证实了这种地贫基因诊断原则的重要性与实用性。

本家系中罕见α-地中海贫血基因^*92A＞G，为α2珠蛋白基因${{3}^{'}}$UTR 的Poly A 区域92A＞G 突变（AATAAA＞AATGAA），最早报道发现于土耳其南部^[7]，此突变位点携带者具有MCV和MCH降低的小细胞低色素表型，纯合个体呈现HbH病表型特征^[8]。本家系为此突变位点于中国人群中的属于首次报道，家系成员生活在中国南方边境地区，可能与地中海贫血突变类型的地域性分布有一定联系。

本研究确定了中国人群中的罕见α-地贫基因α^*92A＞G突变；也提供了携带此突变的静止型α-地贫，以及复合此突变的非缺失型HbH病的基本表型特征；丰富了中国人群α-地中海贫血基因突变谱，有助于指导此病的人群分子筛查、临床基因诊断、产前基因诊断和遗传咨询。